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MHC I四聚体制备技术请教
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| 最近在做MHC I 四聚体，用于检测特异性CTL，出现了奇怪的问题。生物素化之后的mononer用Streptavidin（简写SA）包被的磁珠鉴定已经生物素化好，但是生物素化的效率不清楚，跑了个SDS-PAGE感觉效率至少在50%吧，然后将monomer和SA按摩尔比5：1（SA分10次加入monomer中，保证又足量的monomer与其形成四聚体）的量进行反应，4度过夜。然后用 ph8.0 PBS在millipore 100KD的浓缩管中换液浓缩四次，浓缩至约30ul，用BCA法测四聚体的浓度，蛋白木有啦，不知道咋回事？还请高手指教！ |
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2楼2013-03-26 17:13:10