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考研生涯金虫 (正式写手)
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定点突变
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| 求设计大引物定点突变时的引物设计原则及一些注意事项。谢谢了！ |
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2楼2011-11-26 17:07:33
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5楼2011-11-27 12:42:12
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wanhscn(金币+6): 鼓励新虫友应助回帖！很专业！ 2011-12-06 14:55:50
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引物设计原则 1、引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。 2、碱基要随机分布。 3、引物长度一般在15~30（17bp~25bp）碱基之间。 4、引物GC含量在40%~60%（45%~55%）之间，Tm值最好接近72℃ 5、引物3′端要避开密码子的第3位 6、引物3′端不能选择A，最好选择T 7、扩增产物的单链不能形成二级结构 8、引物自身不能有连续4个碱基的互补 9、引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰 10、引物5′端和中间△G值应该相对较高，而3′ 端△G值较低 11、引物具有特异性 12.碱基随机分布，尽量均匀。 13.3端避开A/T、G/C rich区域。避免A/G、T/C连续结构（2~3个） 14.在DNA测序和PCR中最好用5′末端稳定(如GC含量较多)，而3′末端不太稳定(如AT含量较多)的引物 15．引物与模板配对至少要20 bp，否则特异性低。 |
6楼2011-12-06 11:52:39
临风7071
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7楼2011-12-06 13:02:59
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