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jacky1985310

新虫 (小有名气)

[求助] 求助~关于酵母双杂交的 已有1人参与

最近在做两个蛋白间的互作。第一次酵母双杂交结果筛出了几对阳性。
选取其中一对做了BiFC验证也有互作。
接着对这对蛋白中的一个蛋白做了点突变实验后,再次用Y2H验证,结果互作消失。
但是,作为对照的未突变的蛋白间的相互作用也消失了。重复了很多次,还是同样结果。

不知道谁遇到过类似的问题没?本来发生互作的蛋白,后来就没有互作了。
之前质粒是DH5α提得的,后来的用另一种感受态增殖的。这应该没有影响吧?据了解质粒突变的可能性很小的啊。

期待高手的解答,感激不尽~
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jacky1985310

新虫 (小有名气)

好久以前的求助帖了,自己来解决一下,哈哈
经过一番折磨发现,原来是-80℃活化的AH109菌株屡次平板继代,长时间保存于4℃,酵母产生了未知变化,导致双杂交结果消失。
后来使用-80℃新活化的AH109后结果又回来啦
不知道有类似经历的学友没?
2楼2012-06-27 18:52:33
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litterone123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

现在才看见楼主的贴。想问一下实验的后续:你做了点突变以后找到起作用的氨基酸了吗?设计了几个点突变的位点?恳求回复
3楼2014-11-28 21:53:49
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