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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助~关于酵母双杂交的
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jacky1985310

新虫 (小有名气)

[求助] 求助~关于酵母双杂交的 已有1人参与

最近在做两个蛋白间的互作。第一次酵母双杂交结果筛出了几对阳性。
选取其中一对做了BiFC验证也有互作。
接着对这对蛋白中的一个蛋白做了点突变实验后，再次用Y2H验证，结果互作消失。
但是，作为对照的未突变的蛋白间的相互作用也消失了。重复了很多次，还是同样结果。

不知道谁遇到过类似的问题没？本来发生互作的蛋白，后来就没有互作了。
之前质粒是DH5α提得的，后来的用另一种感受态增殖的。这应该没有影响吧？据了解质粒突变的可能性很小的啊。

期待高手的解答，感激不尽~
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1楼 2011-11-24 10:21:17
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jacky1985310

新虫 (小有名气)
好久以前的求助帖了，自己来解决一下，哈哈
经过一番折磨发现，原来是-80℃活化的AH109菌株屡次平板继代，长时间保存于4℃，酵母产生了未知变化，导致双杂交结果消失。
后来使用-80℃新活化的AH109后结果又回来啦
不知道有类似经历的学友没？
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2楼2012-06-27 18:52:33
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litterone123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

现在才看见楼主的贴。想问一下实验的后续：你做了点突变以后找到起作用的氨基酸了吗？设计了几个点突变的位点？恳求回复
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3楼2014-11-28 21:53:49
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