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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求高手指点：RT-PCR的引物设计
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zhywancx

铜虫 (小有名气)

[求助] 求高手指点：RT-PCR的引物设计

本人要做荧光定量PCR，知道了RNA序列，是否可以直接根据RNA设计引物？如果知道DNA序列，该如何设计？
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mazhaopeng

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1楼 2011-11-20 15:08:17
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zhywancx

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by zgykdxwuhui at 2011-11-22 16:01:32:
一般设计的时候，可以根据目标基因的cDNA序列设计，一个引物应该在两个外显子上，即跨越内含子，这样可以避免扩增DNA。

是必须要跨越内含子么？
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13楼2011-11-22 16:41:12
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

zhywancx(金币+2): 谢谢 2011-11-20 20:05:37
楼主设计引物最好跨内含子，片段长度在80-150bp之间，退火温度一致，可以用在线的primer3或5辅助设计
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jiayoubashaonian
2楼2011-11-20 17:57:06
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muyanshuang

木虫 (正式写手)
一般是可以根据RNA序列设计，荧光定量引物，在基本的引物设计原则下，要求更严格一些。
不允许有引物二聚体和任何杂带！
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3楼2011-11-21 10:19:14
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zhywancx

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by muyanshuang at 2011-11-21 10:19:14:
一般是可以根据RNA序列设计，荧光定量引物，在基本的引物设计原则下，要求更严格一些。
不允许有引物二聚体和任何杂带！

嗯，谢谢，那如果只查到了DNA序列，能根据DNA序列设计RT-PCR的引物吗?
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4楼2011-11-21 11:16:58
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