| 查看: 1883 | 回复: 13 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
串联表达的问题
|
||
| 想请教各位高手一个问题。我有两个酶基因需要表达，由于两个基因在染色体上的位置是相邻的，A800bp左右，B为1.1kb左右，A在B的上游，中间只间隔了19bp，并且已经验证了它们处于同一个操纵子，因此考虑将两个基因一起扩增后接入pET-28a，16度表达过夜，电泳检测发现只表达了A基因，为包涵体表达。后来我在B基因前面又插入了一段T7启动子序列，同样条件表达，电泳检测就只表达了B基因。这两个基因我分别接入pET-28a表达的话，均能成功表达，只是A表达多数为包涵体，B为可溶表达。这个问题纠结了我很长时间了，不知道该怎么解释。。还望各位高手帮我分析分析。先拜谢了。 |
回复此楼» 猜你喜欢
三甲基碘化亚砜的氧化反应
已经有4人回复
-
请问下大家为什么这个铃木偶联几乎不反应呢
已经有5人回复
-
请问有评职称，把科研教学业绩算分排序的高校吗
已经有5人回复
-
孩子确诊有中度注意力缺陷
已经有12人回复
-
2025冷门绝学什么时候出结果
已经有3人回复
-
天津工业大学郑柳春团队欢迎化学化工、高分子化学或有机合成方向的博士生和硕士生加入
已经有4人回复
-
康复大学泰山学者周祺惠团队招收博士研究生
已经有6人回复
-
AI论文写作工具：是科研加速器还是学术作弊器？
已经有3人回复
-
论文投稿，期刊推荐
已经有4人回复
-
硕士和导师闹得不愉快
已经有13人回复
13楼2011-12-03 20:01:20
啊Q精神
木虫 (小有名气)
- BioEPI: 5
- 应助: 19 (小学生)
- 金币: 3790.5
- 红花: 1
- 帖子: 288
- 在线: 198.4小时
- 虫号: 1491245
- 注册: 2011-11-14
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2011-11-17 08:39:54
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+5): 鼓励新虫发帖交流 2011-11-17 12:15:42
silicare(金币+5): 鼓励新虫发帖交流 2011-11-17 12:15:42
|
你可以用Novagen的Duet系列载体。 这类载体有两个多克隆位点。你把两个基因分别转入到相应的位点，就可以同时表达这两个蛋白了。 pETDuet-1 is designed for the coexpression of two target genes. The vector encodes two multiple cloning sites (MCS), each of which is preceded by a T7 promoter, lac operator and ribosome binding site (rbs). |
3楼2011-11-17 09:37:46
4楼2011-11-17 10:47:12