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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 链霉菌建库
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瓶儿花

金虫 (小有名气)

[求助] 链霉菌建库

因实验需要，要建立链霉菌文库，目前，基因组DNA提取出来的纯度和浓度不够实验要求，我想请问各位虫友，有谁有做过这方面的内容，请给予相关的指导，如基因组DNA提取的方法有哪些要注意的，跟普通的方法有什么不同的，已经提了4个月了。。。跪求！
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1楼 2011-11-09 10:45:06
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guojing113

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

本人也做链霉菌文库，DNA探索了半年才弄的差不多，刚刚开始的时候一点也提取不出来，看了很多文献总结了方法后提出来了，要是可以的话，可以留下QQ交流
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听雨
2楼2011-11-23 17:08:58
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shuangzi8761

银虫 (著名写手)
为何不让公司建库呢？？
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3楼2011-11-23 18:34:17
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yuechangwu

银虫 (正式写手)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 瓶儿花 at 2011-11-09 10:45:06:
因实验需要，要建立链霉菌文库，目前，基因组DNA提取出来的纯度和浓度不够实验要求，我想请问各位虫友，有谁有做过这方面的内容，请给予相关的指导，如基因组DNA提取的方法有哪些要注意的，跟普通的方法有什么不同 ...

本人建了4个链霉菌基因组文库，很简单呀
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4楼2011-11-23 19:49:57
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yuechangwu

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！ 2011-11-23 20:45:29
瓶儿花(金币+30): 谢谢，我试试看。 2011-11-26 23:14:02
引用回帖:
1楼: Originally posted by 瓶儿花 at 2011-11-09 10:45:06:
因实验需要，要建立链霉菌文库，目前，基因组DNA提取出来的纯度和浓度不够实验要求，我想请问各位虫友，有谁有做过这方面的内容，请给予相关的指导，如基因组DNA提取的方法有哪些要注意的，跟普通的方法有什么不同 ...

如果是建立fosmid文库的话采取 改良热酚法：28度液体摇菌3天左右，5000rpm收集菌体，STE洗涤2次， 加入溶菌酶 37度过夜，加入2%SDS 55度1h，后边就是酚氯仿抽提，乙酸钠/乙醇沉淀

如果是构建bac库，就要利用低熔点琼脂糖酶解法
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5楼2011-11-23 20:08:43
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