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汕头大学海洋科学接受调剂
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新虫 (初入文坛)

[求助] 蓝白斑筛选

情况是这样的:我的目的片段与T载体连接后是成功的,接下来用该重组质粒双酶切下来的目的片段跟另外一个质粒P连接,一直没有成功。P质粒有氯霉素抗性,我连接转化后,在氯霉素平板上长了单菌落,要么质粒中没有目的片段(做了3次),要么质粒都没有提出来(一次)。我曾经怀疑是我连接没有成功,可是我做了4遍了,不可能一次都不成功吧。。。
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


zhang8826857(金币+1): 鼓励应助 2011-11-10 22:03:13
为什么要TA克隆呢,我都是直接在目的片段两端引物上分别加上酶切位点和保护碱基,扩增片段后直接双酶切,然后与质粒载体连接,很好连的呀
人生百态原为海,看破红尘方为岸!
3楼2011-11-10 20:32:25
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kika8014

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857(金币+5): 鼓励新虫,加油哦 2011-11-08 12:33:14
才做三次,没连接上很正常呀,建议多试几个比例。平板上只长了单菌落,显然不正常,我师妹有好几次是那样,也都没达到目的,建议逐个检查一下氯霉素是否失活,感受态细胞是否有问题,然后就是连接问题。
车到山前必有路
2楼2011-11-08 11:56:06
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