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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 蓝白斑筛选
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106041003

新虫 (初入文坛)

[求助] 蓝白斑筛选

情况是这样的：我的目的片段与T载体连接后是成功的，接下来用该重组质粒双酶切下来的目的片段跟另外一个质粒P连接，一直没有成功。P质粒有氯霉素抗性，我连接转化后，在氯霉素平板上长了单菌落，要么质粒中没有目的片段（做了3次），要么质粒都没有提出来（一次）。我曾经怀疑是我连接没有成功，可是我做了4遍了，不可能一次都不成功吧。。。
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1楼 2011-11-08 10:47:32
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kika8014

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857(金币+5): 鼓励新虫，加油哦 2011-11-08 12:33:14
才做三次，没连接上很正常呀，建议多试几个比例。平板上只长了单菌落，显然不正常，我师妹有好几次是那样，也都没达到目的，建议逐个检查一下氯霉素是否失活，感受态细胞是否有问题，然后就是连接问题。
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车到山前必有路
2楼2011-11-08 11:56:06
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 鼓励应助 2011-11-10 22:03:13
为什么要TA克隆呢，我都是直接在目的片段两端引物上分别加上酶切位点和保护碱基，扩增片段后直接双酶切，然后与质粒载体连接，很好连的呀
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人生百态原为海，看破红尘方为岸！
3楼2011-11-10 20:32:25
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