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junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生

应助: 0 (幼儿园)
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红花: 1
帖子: 171
在线: 66.1小时
虫号: 1097534
注册: 2010-09-13
性别: MM
专业: 兽医传染病学

[求助] 质粒怎么会提不出来'?

用试剂盒小提质粒时，从来没遇到过的现象：加完buffer2混匀，有些不清楚，以为正常，加完3混匀，不是明显的白色沉淀，而是整体的蛋白胶状物，离心12000rpm，10分钟，没离下东西，只是有透明丝状物

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寻找方向，前进

1楼 2011-11-03 21:10:17

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麻花13

新虫 (小有名气)

应助: 12 (小学生)
金币: -5.5
散金: 100
红花: 3
帖子: 156
在线: 86.9小时
虫号: 1345531
注册: 2011-07-14
专业: 生物化学

会不会是细菌本身的问题？
我以前一直没有注意到，提质粒最好是在平台期的时候提，而是按说明书，摇菌到16小时候提，结果有的时候，菌液会出现絮状沉淀（在后面的实验种，惊奇的发现，出现絮状沉淀后，菌液的OD600值反而下降了，估计是死菌的积聚吧），后来，尝试在适当时间开始测菌液OD600值，当发现其上升速率变慢，或者几乎不上升时，开始提质粒，结果好一点点（但是，在细菌层面，感觉主要因素还是细菌克隆质粒的活性，太老的菌，效果就不会好）