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wqj1988926

金虫 (正式写手)

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[求助] race 求助

最近做用race反应，用的是takara的smart race试剂盒，有些细节上的问题想向做过的前辈们请教。
1.制备race ready cdna时，rna的260/230的值只有1.3左右，对实验会不会有影响
2.制备5，race反应过程中的smart oligo是要和rna、cds primer A一起72℃ 3min，42℃ 2min吗
3.设计了基因特异性引物，与UPM一起pcr，只有拖尾的一块，如何解决？

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风雪夜归人

1楼 2011-11-03 13:21:20

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刘仕博

金虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木(金币+2): 谢谢应助 2012-01-05 13:39:58
wqj1988926(金币+2): 2012-02-15 20:04:49

1.RACE一般对RNA的要求还是挺高的吧，所以尽量保证RNA的质量吧，如果最开始的模板都质量不好的话以后的实验结果就很难保证。
2.根据说明书吧，小木虫里面也有的下载。
3.如果只有一段拖尾的话是不是引物设计的不对呀，或者改变下PCR的反应条件看下。我做了几个基因的RACE，就是因为引物设计的问题，导致最后的反应条件摸索了很久，其实不一定要按照他给的条件，根据你的引物自己摸索下看看吧。