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¡ï ¡ï ¡ï ¡ï ¡ï Î÷¹Ï(½ð±Ò+5): Good£¡ 2011-11-28 17:49:24
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1£®ÏÞÖÆÐÔƬ¶Î³¤¶È¶à̬ÐÔ£¨Restriction Fragment Length Polymorphism£¬RFLP£©£ºÓÉDNA µÄ¶à̬ÐÔ£¬ÖÂʹDNA ·Ö×ÓµÄÏÞÖÆøÇÐλµã¼°ÊýÄ¿·¢Éú¸Ä±ä£¬ÓÃÏÞÖÆøÇиî»ùÒò×飬Ëæºó½øÐбȽϡ£ÏÖÔÚ¶à²ÉÓÃPCR-RFLP·¨½øÐÐÑо¿»ùÒòµÄÏÞÖÆÐÔƬ¶Î³¤¶È¶à̬ÐÔ¡£
2£®µ¥Á´¹¹Ïó¶à̬ÐÔ£¨SSCP£©£ºÊÇÒ»ÖÖ»ùÓÚµ¥Á´DNA¹¹Ïó²î±ðµÄµãÍ»±ä¼ì²â·½·¨¡£Ïàͬ³¤¶ÈµÄµ¥Á´DNAÈç¹û˳Ðò²»Í¬£¬ÉõÖÁµ¥¸ö¼î»ù²»Í¬£¬¾Í»áÐγɲ»Í¬µÄ¹¹Ïó¡£ÔÚµçӾʱӾ¶¯µÄËٶȲ»Í¬¡£¶àÓÃÓÚ¼ø¶¨ÊÇ·ñ´æÔÚÍ»±ä¼°Õï¶Ïδ֪ͻ±ä¡£
3£®PCR-ASO̽Õë·¨£¨PCR-allele specific oligonucleotide, ASO£©£º¼´µÈλ»ùÒòÌØÒìÐԹѺËÜÕËá̽Õë·¨¡£ÔÚPCRÀ©ÔöDNAƬ¶Îºó£¬Ö±½ÓÓëÏàÓ¦µÄ¹ÑºËÜÕËá̽ÔÓ½»£¬¼´¿ÉÃ÷È·Õï¶ÏÊÇ·ñÓÐÍ»±ä¼°Í»±äÊÇ´¿ºÏ×Ó»¹ÊÇÔÓºÏ×Ó¡£
4. PCR-SSO·¨£ºSSO¼¼Êõ¼´ÊÇ˳ÐòÌØÒì¹ÑºËÜÕËá·¨£¨Sequence Specific Oligonucleotide, SSO£©¡£ÔÀíÊÇPCR»ùÒòƬ¶ÎÀ©ÔöºóÀûÓÃÐòÁÐÌØÒìÐԹѺËÜÕËá̽Õ룬ͨ¹ýÔÓ½»µÄ·½·¨½øÐÐÀ©ÔöƬ¶ÎµÄ·ÖÎö¼ø¶¨¡£
5. PCR-SSP·¨£ºÐòÁÐÌØÒìÐÔÒýÎï·ÖÎö¼´¸ù¾Ý¸÷µÈλ»ùÒòµÄºËÜÕËáÐòÁУ¬Éè¼Æ³öÒ»Ì×Õë¶ÔÿһµÈλ»ùÒòÌØÒìÐԵģ¨allele-specific£©¡¢»ò×éÌØÒìÐÔ (group-specific)µÄÒýÎ´Ë¼´ÎªÐòÁÐÌØÒìÐÔÒýÎSSP£©¡£SSPÖ»ÄÜÓëijһµÈλ»ùÒòÌØÒìÐÔƬ¶ÎµÄ¼î»ùÐòÁл¥²¹ÐÔ½áºÏ£¬Í¨¹ýPCRÌØÒìÐÔµØÀ©Ôö¸Ã»ùÒòƬ¶Î£¬´Ó¶ø´ïµ½·ÖÎö»ùÒò¶à̬ÐÔµÄÄ¿µÄ¡£
6. PCR-Ó«¹â·¨£ºÓÃÓ«¹â±ê¼ÇPCRÒýÎïµÄ5¡¯¶Ë£¬Ó«¹âȾÁÏFAMºÍJOE³ÊÂÌÉ«Ó«¹â£¬TAMRA³ÊºìÉ«Ó«¹â£¬COUM ³ÊÀ¼É«Ó«¹â£¬²»Í¬Ó«¹â±ê¼ÇµÄ¶àÖÖÒýÎïͬʱ²Î¼Ó·´Ó¦£¬PCRÀ©Ôö´ý¼ì²âµÄDNA£¬ºÏ³ÉµÄ²úÎï·Ö±ð´øÓÐÒýÎï5¡¯¶ËµÄȾÁÏ£¬ºÜÈÝÒ×·¢ÏÖÄ¿µÄ»ùÒò´æÔÚÓë·ñ¡£
7. PCR-DNA²âÐò£ºÊÇÕï¶Ïδ֪ͻ±ä»ùÒò×îÖ±½ÓµÄ·½·¨£¬ÓÉÓÚPCR¼¼ÊõµÄÓ¦Óã¬Ê¹µÃDNA ²âÐò¼¼Êõ´Ó¹ýÈ¥µÄ·Ö×Ó¿Ë¡ºó²âÐò½øÈëPCRÖ±½Ó²âÐò¡£PCR²úÎïÔÚ×Ô¶¯²âÐòÒÇÉϵçÓ¾ºó²âÐò¡£³£Ó÷½·¨ÓУºSangerË«ÍÑÑõÄ©¶ËÖÕÖ¹·¨;Maxam-Gilbert»¯Ñ§Áѽⷨ£»DNA²âÐòµÄ×Ô¶¯»¯¡£Ä¿Ç°DNA˳ÐòÈ«×Ô¶¯¼¤¹â²â¶¨·¨ÊÇ×îÏȽøµÄ·½·¨¡£
8. PCRÖ¸ÎÆͼ·¨£¨PCR-fingerprints£©£ºÊµÓÃÓÚ¿ìËÙµÄͬÖÖÒìÐÍDR/DwÅäÐÍ¡£ÔÚDR/DW´¿ºÏ×Ó¼°ÔÓºÏ×Ó¸öÌåÖУ¬Ã¿ÖÖDRµ¥±¶Ðͼ°Ã¿ÖÖµ¥±¶ÐÍ×éºÏËù²úÉúµÄµ¥Á´»·×´½á¹¹µÄ´óС¡¢ÊýÄ¿ºÍλÖø÷Ò죬ÓÉÓÚͬÖÊË«Á´ºÍÒìÖÊË«Á´Ö®¼äµÄ·Ö×Ó¹¹Ïó²»Í¬¡£
9. »ùÒòоƬ·¨£ºÓÖ³ÆΪDNA ΢̽ÕëÕóÁУ¨Micro array£©¡£ËüÊǼ¯³ÉÁË´óÁ¿µÄÃܼ¯ÅÅÁеĴóÁ¿ÒÑÖªµÄÐòÁÐ̽Õ룬ͨ¹ýÓë±»±ê¼ÇµÄÈô¸É°ÐºËËáÐòÁл¥²¹Æ¥Å䣬ÓëоƬÌض¨Î»µãÉϵÄ̽ÕëÔÓ½»£¬ÀûÓûùÒòоƬÔÓ½»Í¼Ïó£¬È·¶¨ÔÓ½»Ì½ÕëµÄλÖ㬱ã¿É¸ù¾Ý¼î»ù»¥²¹Æ¥ÅäµÄÔÀíÈ·¶¨°Ð»ùÒòµÄÐòÁС£ÕâÒ»¼¼ÊõÒÑÓÃÓÚ»ùÒò¶à̬ÐԵļì²â¡£¶Ô¶à̬ÐÔºÍÍ»±ä¼ì²âÐÍ»ùÒòоƬ²ÉÓöàÉ«Ó«¹â̽ÕëÔÓ½»¼¼Êõ¿ÉÒÔ´ó´óÌá¸ßоƬµÄ׼ȷÐÔ¡¢¶¨Á¿¼°¼ì²â·¶Î§¡£Ó¦ÓøßÃܶȻùÒòоƬ¼ì²âµ¥¼î»ù¶à̬ÐÔ£¬Îª·ÖÎöSNPsÌṩÁ˱ã½ÝµÄ·½·¨¡£
10. AFLP£¨Amplication Fragment Length Polymorphism£©·¨
AFLP¼¼ÊõÊÇÒ»ÏîеķÖ×Ó±ê¼Ç¼¼Êõ£¬ÊÇ»ùÓÚPCR¼¼ÊõÀ©Ôö»ùÒò×éDNAÏÞÖÆÐÔƬ¶Î£¬»ùÒò×éDNAÏÈÓÃÏÞÖÆÐÔÄÚÇÐøÇиȻºó½«Ë«Á´½ÓÍ·Á¬½Óµ½DNAƬ¶ÎµÄÄ©¶Ë£¬½ÓÍ·ÐòÁкÍÏàÁÚµÄÏÞÖÆÐÔλµãÐòÁУ¬×÷ΪÒýÎï½áºÏλµã¡£ÏÞÖÆÐÔƬ¶ÎÓöþÖÖøÇиî²úÉú£¬Ò»ÖÖÊǺ±¼ûÇиîø£¬Ò»ÖÖÊdz£ÓÃÇиîø¡£Ëü½áºÏÁËRFLPºÍPCR¼¼ÊõÌص㣬¾ßÓÐRFLP¼¼ÊõµÄ¿É¿¿ÐÔºÍPCR¼¼ÊõµÄ¸ßЧÐÔ¡£ÓÉÓÚAFLPÀ©Ôö¿ÉʹijһƷÖÖ³öÏÖÌض¨µÄDNAÆ×´ø£¬¶øÔÚÁíһƷÖÖÖпÉÄÜÎÞ´ËÆ×´ø²úÉú£¬Òò´Ë£¬ÕâÖÖͨ¹ýÒýÎïÓÕµ¼¼°DNAÀ©ÔöºóµÃµ½µÄDNA¶à̬ÐÔ¿É×öΪһÖÖ·Ö×Ó±ê¼Ç¡£AFLP¿ÉÔÚÒ»´Îµ¥¸ö·´Ó¦Öмì²âµ½´óÁ¿µÄƬ¶Î¡£ÒÔ˵AFLP¼¼ÊõÊÇÒ»ÖÖеĶøÇÒÓкܴó¹¦ÄܵÄDNAÖ¸ÎƼ¼Êõ¡£
11. DGGE£¨denaturing gradinent electrophoresis,DGGE£©·¨
±äÐÔÌݶÈÄý½ºµçÓ¾·¨£¨£© DGGE·¨·ÖÎöPCR²úÎÈç¹ûÍ»±ä·¢ÉúÔÚ×îÏȽâÁ´µÄDNAÇøÓò£¬¼ì³öÂÊ¿É´ï100£¥£¬¼ì²âƬ¶Î¿É´ï1kb£¬×îÊÊΧΪ100bp-500bp¡£»ù±¾ÔÀí»ùÓÚµ±Ë«Á´DNAÔÚ±äÐÔÌݶÈÄý½ºÖнøÐе½ÓëDNA±äÐÔʪ¶ÈÒ»ÖµÄÄý½ºÎ»ÖÃʱ£¬DNA·¢Éú²¿·Ö½âÁ´£¬µçÓ¾ÊÊÒÆÂÊϽµ£¬µ±½âÁ´µÄDNAÁ´ÖÐÓÐÒ»¸ö¼î»ù¸Ä±äʱ£¬»áÔÚ²»Í¬µÄʱ¼ä·¢Éú½âÁ´£¬ÒòÓ°ÏìµçÓ¾Ëٶȱ仯µÄ³Ì¶È¶ø±»·ÖÀë¡£ÓÉÓÚ±¾·¨ÊÇÀûÓÃζȺÍÌݶÈÄý½ºÇ¨ÒÆÂÊÀ´¼ì²â£¬ÐèÒªÒ»Ì×רÓõĵçÓ¾×°Ö㬺ϳɵÄPCRÒýÎï×îºÃÔÚ5`Ä©¶Ë¼ÓÒ»¶Î40bp-50bpµÄGC¼Ð£¬ÒÔÀûÓÚ¼ì²â·¢ÉúÓÚ¸ßÈÛµãÇøµÄÍ»±ä¡£ÔÚDGGEµÄ»ù´¡ÉÏ£¬ÓÖ·¢Õ¹ÁËÓÃʪ¶ÈÌݶȴúÌ滯ѧ±äÐÔ¼ÁµÄTGGE·¨£¨Î¶ÈÌݶÈÄý½ºµçÓ¾temperature gradient gelelectrophoresis,TGGE£©¡£DGGEºÍTGGE¾ùÓÐÉÌÆ·»¯µÄµçÓ¾×°Ö㬸÷¨Ò»¾½¨Á¢£¬²Ù×÷Ò²½Ï¼ò±ã£¬ÊʺÏÓÚ´óÑù±¾µÄ¼ì²âɸѡ¡£
12. RAPD£¨Random amplified polymorphic DNA£©·¨
ÔËÓÃËæ»úÒýÎïÀ©ÔöÑ°ÕÒ¶à̬ÐÔDNAƬ¶Î¿É×÷Ϊ·Ö×Ó±ê¼Ç¡£ÕâÖÖ·½·¨¼´ÎªRAPD( Random amplified polymorphic DNA£¬Ëæ»úÀ©ÔöµÄ¶à̬ÐÔDNA)¡£¾¡¹ÜRAPD¼¼Êõµ®ÉúµÄʱ¼äºÜ¶Ì, µ«ÓÉÓÚÆä¶ÀÌصļì²âDNA¶à̬ÐԵķ½Ê½ÒÔ¼°¿ìËÙ¡¢¼ò±ãµÄÌصã,ʹÕâ¸ö¼¼ÊõÒÑÉø͸ÓÚ»ùÒò×éÑо¿µÄ¸÷¸ö·½Ãæ¡£¸ÃRAPD¼¼Êõ½¨Á¢ÓÚPCR¼¼Êõ»ù´¡ÉÏ,ËüÊÇÀûÓÃһϵÁÐ(ͨ³£Êý°Ù¸ö)²»Í¬µÄËæ»úÅÅÁмî»ù˳ÐòµÄ¹Ñ¾ÛºËÜÕËáµ¥Á´(ͨ³£Îª10¾ÛÌå)ΪÒýÎï,¶ÔËùÑо¿»ùÒò×éDNA½øÐÐPCRÀ©Ôö.¾Û±ûÏ©õ£°·»òÇíÖ¬ÌǵçÓ¾·ÖÀë,¾EBȾɫ»ò·ÅÉäÐÔ×ÔÏÔÓ°À´¼ì²âÀ©Ôö²úÎïDNAƬ¶ÎµÄ¶à̬ÐÔ,ÕâЩÀ©Ôö²úÎïDNAƬ¶ÎµÄ¶à̬ÐÔ·´Ó³ÁË»ùÒò×éÏàÓ¦ÇøÓòµÄDNA¶à̬ÐÔ¡£RAPDËùÓõÄһϵÁÐÒýÎïDNAÐòÁи÷²»Ïàͬ,µ«¶ÔÓÚÈÎÒ»ÌØÒìµÄÒýÎï,Ëüͬ»ùÒò×éDNAÐòÁÐÓÐÆäÌØÒìµÄ½áºÏλµã.ÕâЩÌØÒìµÄ½áºÏλµãÔÚ»ùÒò×éijЩÇøÓòÄڵķֲ¼Èç·ûºÏPCRÀ©Ôö·´Ó¦µÄÌõ¼þ,¼´ÒýÎïÔÚÄ£°åµÄÁ½ÌõÁ´ÉÏÓл¥²¹Î»ÖÃ,ÇÒÒýÎï3'¶ËÏà¾àÔÚÒ»¶¨µÄ³¤¶È·¶Î§Ö®ÄÚ,¾Í¿ÉÀ©Ôö³öDNAƬ¶Î.Òò´ËÈç¹û»ùÒò×éÔÚÕâЩÇøÓò·¢ÉúDNAƬ¶Î²åÈ롢ȱʧ»ò¼î»ùÍ»±ä¾Í¿ÉÄܵ¼ÖÂÕâЩÌض¨½áºÏλµã·Ö²¼·¢ÉúÏàÓ¦µÄ±ä»¯,¶øʹPCR²úÎïÔö¼Ó¡¢È±ÉÙ»ò·¢Éú·Ö×ÓÁ¿µÄ¸Ä±ä¡£Í¨¹ý¶ÔPCR²úÎï¼ì²â¼´¿É¼ì³ö»ùÒò×éDNAµÄ¶à̬ÐÔ¡£·ÖÎöʱ¿ÉÓõÄÒýÎïÊýºÜ´ó,ËäÈ»¶Ôÿһ¸öÒýÎï¶øÑÔÆä¼ì²â»ùÒò×éDNA¶à̬ÐÔµÄÇøÓòÊÇÓÐÏÞµÄ,µ«ÊÇÀûÓÃһϵÁÐÒýÎïÔò¿ÉÒÔʹ¼ì²âÇøÓò¼¸ºõ¸²¸ÇÕû¸ö»ùÒò×é¡£Òò´ËRAPD¿ÉÒÔ¶ÔÕû¸ö»ùÒò×éDNA½øÐжà̬ÐÔ¼ì²â¡£ÁíÍ⣬RAPDƬ¶Î¿Ë¡ºó¿É×÷ΪRFLPµÄ·Ö×Ó±ê¼Ç½øÐÐ×÷ͼ·ÖÎö¡£ |
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