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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

oceanworld(金币+2): 2011-12-27 08:18:50
引用回帖:
10楼: Originally posted by liuzhan2705 at 2011-12-19 20:05:37:
您好！想向您请教一下脉冲场电泳的问题，我现在在做脉冲场电泳，可是自己做的胶块每次都切不开？条带要么在孔里，要么整个通道都是拖尾现象~请问这是怎么回事？在制作过程中有什么特别注意事项吗、？不胜感激~

不知道你胶浓度是多少的，多少电压，多长时间
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
11楼2011-12-19 20:07:25
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liuzhan2705

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-12-19 20:07:25:
不知道你胶浓度是多少的，多少电压，多长时间

1%的LMP，电压是6V，电泳时间为15小时，分离片段大小约为130Kb
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12楼2011-12-19 20:36:13
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brightfuture01

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【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by liuzhan2705 at 2011-12-19 20:36:13:
1%的LMP，电压是6V，电泳时间为15小时，分离片段大小约为130Kb

这个电压偏小了。。。。。。。。
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13楼2011-12-19 20:42:45
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liuzhan2705

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-12-19 20:42:45:
这个电压偏小了。。。。。。。。

是吗？可是Marker跑的挺好的啊~
请问起始转换时间和最终转换时间是啥意思？
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14楼2011-12-19 20:47:41
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brightfuture01

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14楼: Originally posted by liuzhan2705 at 2011-12-19 20:47:41:
是吗？可是Marker跑的挺好的啊~
请问起始转换时间和最终转换时间是啥意思？

你跑了半天脉冲场你不知道脉冲场的原理么？
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15楼2011-12-19 20:51:13
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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你用的什么marker？
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16楼2011-12-19 20:53:00
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liuzhan2705

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-12-19 20:53:00:
你用的什么marker？

大致的原理懂~就是这俩名词跟实际没联系起来~我用的是NEB的marker，最大分子量为190Kb
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17楼2011-12-19 21:01:16
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brightfuture01

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【答案】应助回帖

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17楼: Originally posted by liuzhan2705 at 2011-12-19 21:01:16:
大致的原理懂~就是这俩名词跟实际没联系起来~我用的是NEB的marker，最大分子量为190Kb

整个泳道拖尾就对了，孔里面跑不出来的多为过大的DNA或者是其他杂质。

脉冲场电泳时方向是变化的，你好好看看原理吧。+60度角跑一定时间，-60度角跑一定时间，这样才会使得分辨率更高。
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18楼2011-12-19 21:06:07
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浅歌99

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引用回帖:
10楼: Originally posted by liuzhan2705 at 2011-12-19 20:05:37
您好！想向您请教一下脉冲场电泳的问题，我现在在做脉冲场电泳，可是自己做的胶块每次都切不开？条带要么在孔里，要么整个通道都是拖尾现象~请问这是怎么回事？在制作过程中有什么特别注意事项吗、？不胜感激~...

楼主你好，我现在也在做BAC ，同样出现了包埋块酶切切不动的情况，请问您当时是怎么解决的啊？
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19楼2013-11-28 14:36:46
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liuzhan2705

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引用回帖:
19楼: Originally posted by 浅歌99 at 2013-11-28 14:36:46
楼主你好，我现在也在做BAC ，同样出现了包埋块酶切切不动的情况，请问您当时是怎么解决的啊？...

应该不是不动，而是应该有拖尾吧？这很正常，由于随机切出来的条带大小不一，所以条带总会有拖尾，可以尝试酶切时将包埋块切成25个小碎块进行部分酶切
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20楼2013-11-30 22:04:01
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