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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

oceanworld(金币+2): 2011-12-27 08:18:50
引用回帖:
10楼: Originally posted by liuzhan2705 at 2011-12-19 20:05:37:
您好!想向您请教一下脉冲场电泳的问题,我现在在做脉冲场电泳,可是自己做的胶块每次都切不开?条带要么在孔里,要么整个通道都是拖尾现象~请问这是怎么回事?在制作过程中有什么特别注意事项吗、?不胜感激~

不知道你胶浓度是多少的,多少电压,多长时间
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
11楼2011-12-19 20:07:25
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liuzhan2705

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-12-19 20:07:25:
不知道你胶浓度是多少的,多少电压,多长时间

1%的LMP,电压是6V,电泳时间为15小时,分离片段大小约为130Kb
12楼2011-12-19 20:36:13
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by liuzhan2705 at 2011-12-19 20:36:13:
1%的LMP,电压是6V,电泳时间为15小时,分离片段大小约为130Kb

这个电压偏小了。。。。。。。。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
13楼2011-12-19 20:42:45
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liuzhan2705

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-12-19 20:42:45:
这个电压偏小了。。。。。。。。

是吗?可是Marker跑的挺好的啊~
请问起始转换时间和最终转换时间是啥意思?
14楼2011-12-19 20:47:41
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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引用回帖:
14楼: Originally posted by liuzhan2705 at 2011-12-19 20:47:41:
是吗?可是Marker跑的挺好的啊~
请问起始转换时间和最终转换时间是啥意思?

你跑了半天脉冲场你不知道脉冲场的原理么?
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
15楼2011-12-19 20:51:13
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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你用的什么marker?
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
16楼2011-12-19 20:53:00
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liuzhan2705

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
16楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-12-19 20:53:00:
你用的什么marker?

大致的原理懂~就是这俩名词跟实际没联系起来~我用的是NEB的marker,最大分子量为190Kb
17楼2011-12-19 21:01:16
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by liuzhan2705 at 2011-12-19 21:01:16:
大致的原理懂~就是这俩名词跟实际没联系起来~我用的是NEB的marker,最大分子量为190Kb

整个泳道拖尾就对了,孔里面跑不出来的多为过大的DNA或者是其他杂质。

脉冲场电泳时方向是变化的,你好好看看原理吧。+60度角跑一定时间,-60度角跑一定时间,这样才会使得分辨率更高。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
18楼2011-12-19 21:06:07
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浅歌99

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by liuzhan2705 at 2011-12-19 20:05:37
您好!想向您请教一下脉冲场电泳的问题,我现在在做脉冲场电泳,可是自己做的胶块每次都切不开?条带要么在孔里,要么整个通道都是拖尾现象~请问这是怎么回事?在制作过程中有什么特别注意事项吗、?不胜感激~...

楼主你好,我现在也在做BAC ,同样出现了包埋块酶切切不动的情况,请问您当时是怎么解决的啊?
19楼2013-11-28 14:36:46
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liuzhan2705

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
19楼: Originally posted by 浅歌99 at 2013-11-28 14:36:46
楼主你好,我现在也在做BAC ,同样出现了包埋块酶切切不动的情况,请问您当时是怎么解决的啊?...

应该不是不动,而是应该有拖尾吧?这很正常,由于随机切出来的条带大小不一,所以条带总会有拖尾,可以尝试酶切时将包埋块切成25个小碎块进行部分酶切
20楼2013-11-30 22:04:01
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