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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 过带his标签的蛋白时镍柱上样后颜色变棕色是怎么回事
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌体中的脂类和色素沉积的结果，我的柱子也是这种情况，只要不影响载量就不用管它。如果影响了，就建议你重新挂柱吧。
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11楼2012-03-01 12:58:09
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xudech

木虫 (正式写手)

xiaochong

【答案】应助回帖

引用回帖:
2863230楼: Originally posted by wight3 at 2011-10-22 12:05:09
过带his标签的蛋白时镍柱上样后颜色变棕色是怎么回事
柱子的颜色如下面附图
f3/77/664723_1319256292_773.png

这个明显是被DTT之类的还原为单质Ni了

假如蛋白本身没有颜色的话
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12楼2012-06-28 22:23:11
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nmgdwg

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也遇到过类似情况，不过我用的是GE1mL 预装柱。所有过柱的液体先用Millipore 0.22 过滤，再过柱子，柱子就不变色。如果将滤膜接在柱子上，只要一过样品，柱子就成铁锈的颜色。不过，变色的柱子用脱镍，再用NaOH洗洗，就能恢复原样了（颜色是变回来了，载样量变不变就不清楚了）
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13楼2012-06-29 15:55:40
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Y棒棒冰Y

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

游离的镍离子被还原了
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14楼2012-11-24 21:23:43
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

蛋白样品和普通缓冲液不会导致这样的现象，但缓冲液中的还原剂则会引起Zn2+的还原反应所致。
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15楼2012-11-27 15:07:51
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陇西才神

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wizardfan: 金币+5, 首贴奖励，以后多发帖交流 2012-11-28 07:07:45
你给的图片貌似是一根分子筛，你所谓的变成棕色是在Ni亲和柱上还是在分子筛上才变成棕色？如果是Ni亲和beads呈棕色，按我的经验，应该是你buffer中含有DTT，b-ME等还原剂，将二价Ni离子还原所致。如果是在分子筛上变色，应该是你的样品中有显色杂质，至于你的蛋白是黄色，首先考虑一下是不是结合核酸，这是最可能的因素。另外，我并不觉得蛋白结合色素分子跟发好文章有啥联系。
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16楼2012-11-28 03:55:46
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stickforver

银虫 (小有名气)
楼主这个问题解决了吗，我最近表达了一个蛋白，跟楼主描述的很像，诱导后离心可以发现菌体变成了棕色，挂镍柱时柱子都变成了棕色（Buffer里不含DTT），用500mM的咪唑清洗柱子时可以去掉棕色。
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Neversaynever.
17楼2016-11-09 08:47:59
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微雨青塘

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

您好，请问您这个有颜色的蛋白找到是什么原因使它带有颜色了吗？我也有一个类似的蛋白，想和您讨论一下。
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18楼2018-03-22 21:56:51
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