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细菌的培养 已有9人参与
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一般的细菌都可以用人工的方法进行培养，以研究它们的各种生物学特征或制备菌苗。培养细菌时，除采用合适的培养基外，还要供给一些必要的培养条件，如温度、气体等。 1. 进行活化的话是用斜面好还是放液体培养基摇瓶好呢？保藏的话用多少浓度的甘油？ 1.1 斜面和平板活化与液体活化都可以，斜面较好，但液体活化如果时间控制得好，不会造成传代多的现象。 1.2 基因工程酵母的保存方法：与野生菌一样，要用甘油保藏的话，最好是在对数期，一般摇床培养20小时左右，过夜培养后保藏就可以。可将酵母菌在液体培养基培养3~5天，然后与100%甘油1：1混合冻存即可.即甘油浓度50%。 2. 菌体不生长 2.1 先查培养条件。温度很关键， 校正一下温度计是否正常指示；还要其他条件（湿度，摇床转速等）。 2.2 查原材料。尤其是原材料的保存问题，最好在4度冷藏。 2.3 查菌种 2.4 如果长得慢，加大接种量看一下。 2.5 消毒有没有问题 3.为什么会发生菌体自溶？发生菌体自溶会让发酵参数发生什么变化 自溶和培养条件有关系，比如PH突然变化会引起菌体渗透压的变化导致自溶，还有温度的影响等；一般来说菌体也有自己的生存时限（依培养物变化而变化），也会产生自溶。 3.1 控制条件不好，PH和温度不适合溶氧太低使菌体生长异常，产生溶菌酶自溶； 3.2 营养条件不好，营养跟不上，碳源不足自溶； 3.3 菌体衰老自溶，菌种培养时间过长，造成老化。改换酵母粉，增加一些生物素及微量元素可以消除自溶的问题； 3.4 过早的表达产物往往会对细胞产生毒害作用，使宿主菌的比生长速率下降甚至使细胞死亡、自溶； 3.5 感染噬菌体 发生菌体自溶现象：pH升高，溶氧升高，氨氮回升，镜检时菌体空、碎 4. 培养基组分对芽孢杆菌产生芽孢的影响 一般加入Mn离子有助芽孢形成，另外培养基中注意磷酸盐含量不要太高了，高了不利于形成芽孢的。Mn的浓度大概在5-50ppm之间。 5. 质粒小量提取之细菌的培养及收集 将含有质粒菌种接种在LB固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24h。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12小时至对数生长后期。 |
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