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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 两种引物的PCR电泳图，做了多次还是不解
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lf6220

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

Marker跑不好，就是电泳缓冲液的原因，需要更换
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11楼2011-10-17 19:39:15
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fisheart

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+1): good 2011-10-19 19:00:16
西瓜(金币+1): good 2011-10-19 19:00:17
引用回帖:
9楼: Originally posted by 树宝宝zyx at 2011-10-17 12:49:46:
电泳液是配的50倍的保存在4°C冰箱，需要的时候稀释了再用的。不过那个配了倒是有2个多月了，是不是有关系呢。制胶和电泳液下次我尽量用统一配的，有时候不是同一次配的可能浓度稍有不同。下面是我新做的PCR，用 ...

储存液4度2个月肯定是没关系的，不是同一次配的缓冲液这种偏差可以忽略了，MAKER一直跑这样有可能是MARER自身的关系，有些公司的MARKER质量很差，跑出来很难看，借其他课题组的marker试试，空白对照出条带是污染了额，除了常用的试剂，检查下引物，最好重新合成分装用
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12楼2011-10-17 19:54:22
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fisheart

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

又看了下你的图，用荧光引物的空白是有条带的，用另一对引物的空白是没条带的，那么应该是这对荧光引物有污染，一定要换掉
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树宝宝zyx
13楼2011-10-17 19:57:52
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树宝宝zyx

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by fisheart at 2011-10-17 19:57:52:
又看了下你的图，用荧光引物的空白是有条带的，用另一对引物的空白是没条带的，那么应该是这对荧光引物有污染，一定要换掉

恩，不过我们这边有个老师说我这个是引物的二聚体，说还是要摸条件
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科研真辛苦！
14楼2011-10-18 10:49:23
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rfengyi

禁虫 (正式写手)
树宝宝zyx(金币+2): 2011-10-19 10:33:58
本帖内容被屏蔽
15楼2011-10-18 18:10:08
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fisheart

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-10-19 19:00:28
引用回帖:
14楼: Originally posted by 树宝宝zyx at 2011-10-18 10:49:23:
恩，不过我们这边有个老师说我这个是引物的二聚体，说还是要摸条件

引物二聚体是最前面的那条，这个很常见的，中间那条扩增出来的，和你目的条带大小一致的话就考虑是污染问题
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树宝宝zyx
16楼2011-10-18 23:03:36
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树宝宝zyx

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by fisheart at 2011-10-18 23:03:36:
引物二聚体是最前面的那条，这个很常见的，中间那条扩增出来的，和你目的条带大小一致的话就考虑是污染问题

恩好的，我再试试
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科研真辛苦！
17楼2011-10-19 10:34:48
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xiaomuxiaoma

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你的marker是多大的，按照6.7.是100bp的话，
空白有条带的可能是引物二聚体
左起第三条带上面有一段亮的可能是你要的
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18楼2012-04-14 14:03:20
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守望者047

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

maker都跑成这样根本没法继续了，看这几个图感觉maker自身有问题的概率不大，问题可能还是出在缓冲液和胶本身，更换一下电泳缓冲液，重新制胶再试试看，个人建议，仅供参考！
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数往者顺，知来者逆！
19楼2012-06-14 10:34:23
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