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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 有谁做过amoA引物 硝化细菌 pcr
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@@xiaowu@@

铜虫 (初入文坛)

[求助] 有谁做过amoA引物 硝化细菌 pcr

有谁做过amoA引物 硝化细菌 pcr
我做了很长时间 都没有做出来
降落 巢式 梯度pcr都试了
请大侠帮一下
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1楼 2011-10-12 18:42:33
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闲花落地

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857(金币+5): 鼓励新虫 2011-10-24 10:22:24
建议先纯化好DNA，可以采用PCR产物纯化试剂盒纯化或专业的土壤DNA提取试剂盒纯化；其次改变PCR条件，我以前的做法是降低退火温度至49度，增加Taq酶用量至25U/50ul，增加循环数至35个。如果还是扩不出来建议重新提DNA，纯化，扩增。同时强调一点，环境样品DNA一定要分装保存在-80度冰箱，防止其降解。
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6楼2011-10-24 10:01:23
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
rainwander(金币+3, MicEPI+1): 鼓励交流 2011-10-13 10:54:39
@@xiaowu@@(金币+5): 谢谢 2011-10-18 13:24:54
引用回帖:
1楼: Originally posted by @@xiaowu@@ at 2011-10-12 18:42:33:
有谁做过amoA引物 硝化细菌 pcr
我做了很长时间 都没有做出来
降落 巢式 梯度pcr都试了
请大侠帮一下

我有做过~~
这个 你可以从一下几点考虑：
1 模板质量问题： 如果是土壤或者淤泥之类的 模板杂质过多 会影响pcr
2 模板中究竟有没有aob 的存在，最好能用其他方法验证一下，比如富集培养后显色反应
3 如果存在，用巣式的 应该会做出来效果很好，不过需要注意，第一次pcr产物需要稀释50到100倍
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-10-13 10:33:27
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bear0329

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 老夏853 at 2011-10-13 10:33:27:
我有做过~~
这个 你可以从一下几点考虑：
1 模板质量问题： 如果是土壤或者淤泥之类的 模板杂质过多 会影响pcr
2 模板中究竟有没有aob 的存在，最好能用其他方法验证一下，比如富集培养后显色反应
3 如果存在 ...

学习啦
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以马内利！
3楼2011-10-13 11:38:49
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lzhhok

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
zhang8826857(金币+2): 鼓励一下^_^ 2011-10-17 17:21:45
@@xiaowu@@(金币+5): 谢谢 2011-10-18 13:25:13
1、调节模板DNA浓度；
2、加大循环数至40－42；
3、反应体系中加入BSA；
4、再扩不出来，考虑换个效率高一点的Taq酶。
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5楼2011-10-17 13:19:05
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