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1289622木虫 (正式写手)
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[求助]
求助血液样品处理问题
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初次接触血样处理的实验有许多问题不是很明白: 1、分离血浆时采集的血液要立即离心，还是静置一会再离心？有时候采样点不能一次性完成不会影响实验吧？2、离心获得的血浆要立即放入冰箱中吗？由于采样的时间跨度在7个小时，这样之前分离的血浆要在室温条件下至少放置7个小时（实验的地方没有冰箱），这样可行吗？ 3、怎样防止溶血现象?离心获得的血浆都是红色的，抽血时压力不是很大，将血液推入离心管时动作也很缓和（针头已经拔掉），为什么还有溶血现象？ 4、-20℃保存的血浆可以保存多久?血浆怎样复溶？是放在室温下自然融化，还是要在一定的水浴温度下融化？ 5、取空白血浆之前也要禁食吗？为什么？禁食多久？ 6、血浆和血清样品必须要进行蛋白沉淀吗？有的说液液萃取不必进行蛋白沉淀，这种说法正确吗？ 7、乙酸乙酯处理血浆，除能提取药物外还能融入血浆中的什么成分？用它提取药物，氮气吹干后再复溶发现离心管底部有些东西溶解不了，复溶的液体有块状漂浮物，这种情况该怎么办？会不会影响药物的复溶效果？ 8、分离血浆用的肝素钠浓度一般是多大的？肝素钠中的水分对血浆样品有影响吗，什么影响？粉末状的肝素钠怎么配成溶液？ 9、走液相时，样品的色谱峰不是较光滑的线条而是波浪形的线条，这是怎么回事？是柱子的问题吗，怎样解决？ 10、冰冻的血浆样品复溶后血浆里面有一些絮状或是胶状粘稠物质，请问这是什么物质？取血浆的时候没有取到那些粘稠物质，这会影响血浆药物含量的测定吗？ [ Last edited by 1289622 on 2011-10-22 at 09:32 ] |
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7楼2011-11-09 09:01:50
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【答案】应助回帖
1289622(金币+10, 博学EPI+1): 2011-12-06 12:38:15
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好多。。。偶来一个个说说个人的经验吧 1 最好是采集后尽快离心，不过我加了抗凝剂 感觉过了十几分钟一批样品全部出来再离心 也能很好的分离，个人觉得加了抗凝后只要注意不要大幅度晃动导致凝血就行。 2 当然是尽快放入冰箱的 如果实验室么有 就用个泡沫盒子 里面放个冰袋就行啊 低温总是好的 能做到的就尽量做到嘛 虽然我有时候也来不及放冰箱 但也是尽快放入 3 我每次都是加了抗凝以后 全血在ep管里上下轻微颠倒下 都木有溶血 这个完全看你操作了吧 包括放入离心机前也不要大幅度晃动 4 -20℃感觉可以挺久的 我最长一次保存了2-3个月 仍然测定出来了 用的是自然解冻的 5 最好禁食 因为一是和实验组平行 实验组禁食的啊 2是防止食物中的个别成分影响 但觉得影响可以忽略 禁食一般实验组是12-14个小时吧 自由饮水 6 当然要沉淀蛋白啊 不然会对柱子很大损伤 加沉淀剂沉淀蛋白 和液液萃取 都是除去蛋白的过程 因为萃取的过程中 蛋白萃取不出来 所以这两个选择一个效率高的就行 7 还能融入神马东西 这个偶还没考虑过 但是肯定有一些杂质在其中的，还有一些亲脂的东东，吹干后复溶时加入溶剂后，充分涡旋混匀 然后离心取上清 就可以把杂质除去 复溶后有杂质很正常的 所以都要离心取上清 不用担心 8 肝素钠我们一般都是直接用毛细管挑一点放入子弹头 然后弹开 感觉效果不错 因为配了溶液还要吹干 感觉很麻烦 配成溶液后抗凝好像是1:50-100 浓度我等会查查其他帖子 很多人都写过 9 你的不光滑是指神马不光滑？基线还是？ 是基线平稳但是出峰不光滑？这个原因比较多 你详细说下 而且是ms还是液相 10血浆中的一些纤维蛋白 可能还有其他蛋白成分 你把它挑开放在一边 吸取液体的血浆 感觉影响不大 药物分散在液体血浆中的 不过没有影响也是不可能的 大家都有 也就平行了？呵呵 有什么情况在交流讨论吧 |
2楼2011-10-29 15:58:38
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