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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 大孔树脂吸附以后,找不到目的化合物了

如题,6升发酵液,使用大孔树脂吸附后,丙酮洗脱后,使用HPLC检测,找不到目标化合物了。该化合物极性比较小,哪位大侠能给个建议?
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guihaishui

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


karl2100(金币+1): 谢谢! 2011-10-08 00:07:13
karl2100:编辑内容 2011-10-08 00:07
克隆大虾(金币+10): tks 2011-10-08 12:31:00
1、点个薄层或换个HPLC试试,看看是不是HPLC出毛病了;
2、大孔树脂可以产生死吸附,是不是因为你的量小,损失掉了。
3、你先做个预实验看看结果:试试用少量的发酵液(HPLC可以检测到目标成分)上一个小点的大孔树脂柱,先用醇洗脱一下,在用丙酮洗脱看看能否检测到。上述仅供参考

哦,对了,不知你用的那种大孔树脂,是弱极性的,中极性的还行强极性的,按你说目标分子极性较小,该选择非极性或弱极性较好,当然中极性的大孔树脂也可以。

[ Last edited by karl2100 on 2011-10-8 at 00:07 ]
相逢即缘
2楼2011-10-07 23:57:59
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by guihaishui at 2011-10-07 16:57:59:
1、点个薄层或换个HPLC试试,看看是不是HPLC出毛病了;
2、大孔树脂可以产生死吸附,是不是因为你的量小,损失掉了。
3、你先做个预实验看看结果:试试用少量的发酵液(HPLC可以检测到目标成分)上一个小点的大 ...

HPLC没问题,收菌之前检测过样品,再进HPLC还能检测到产物,唯独树脂吸附后,丙酮洗脱后,基本找不到产物了。可能变了?
3楼2011-10-08 12:32:35
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guihaishui

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


qinhy(金币+1): 谢谢回帖~ 2011-10-08 20:13:48
克隆大虾(金币+10): tks,树脂名称为XAD-16,水洗完后,待水流进,直接用丙酮洗脱的,,,为何换用70-90%乙醇呢? 2011-10-12 01:53:18
大孔树脂属于物理吸附,应该不会变。用的非极性还是中极性的大孔树脂?型号多少? 另外,换个洗脱剂试试(如70-90%的乙醇),是不是还没洗下来。
相逢即缘
4楼2011-10-08 19:19:57
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by guihaishui at 2011-10-07 16:57:59:
1、点个薄层或换个HPLC试试,看看是不是HPLC出毛病了;
2、大孔树脂可以产生死吸附,是不是因为你的量小,损失掉了。
3、你先做个预实验看看结果:试试用少量的发酵液(HPLC可以检测到目标成分)上一个小点的大 ...

树脂名称为XAD-16...
5楼2011-10-12 01:54:45
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小黑豆

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


karl2100(金币+1): 谢谢参与讨论! 2011-10-12 23:51:04
克隆大虾(金币+2): tks 2011-10-13 18:41:27
建议洗脱的时候用TLC随时检验,如果没有,考虑样品中目标物量小,被树脂吸附,没有被洗脱
6楼2011-10-12 22:58:11
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 小黑豆 at 2011-10-12 15:58:11:
建议洗脱的时候用TLC随时检验,如果没有,考虑样品中目标物量小,被树脂吸附,没有被洗脱

我们一般用HPLC检测的,根据UV及保留时间及亮度,检测目标产物的。
7楼2011-10-13 18:42:21
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guihaishui

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

克隆大虾(金币+8): tks,多谢... 2011-11-02 17:11:04
引用回帖:
4楼: Originally posted by guihaishui at 2011-10-08 19:19:57:
大孔树脂属于物理吸附,应该不会变。用的非极性还是中极性的大孔树脂?型号多少? 另外,换个洗脱剂试试(如70-90%的乙醇),是不是还没洗下来。

用水洗脱之后,就直接用丙酮洗脱目标物。。。。你们以前用过这种方法吗,可行吗。
如果没用过,我感觉由水直接过渡到丙酮,跨度太大。不如试试位于两者之间极性的洗脱剂,如如70-90%的乙醇。试试,看看怎么样。
另外,我们用过大孔树脂D101,用95%的乙醇去冲洗,一般可以将化合物全部洗下来。因此常在分离富集的最后一步使用
相逢即缘
8楼2011-10-16 23:39:28
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sz168

禁言 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

9楼2011-11-05 16:47:51
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x_iao_le

银虫 (小有名气)

送红花一朵
我想问一下大孔树脂加在发酵液中一起摇菌发酵,那菌丝体和树脂怎么分的开啊,不会都缠在一起了吗,还有就是菌丝体会不会堵住树脂的控啊?
10楼2013-12-30 19:25:39
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