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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 大孔树脂吸附以后，找不到目的化合物了
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 大孔树脂吸附以后，找不到目的化合物了

如题，6升发酵液，使用大孔树脂吸附后，丙酮洗脱后，使用HPLC检测，找不到目标化合物了。该化合物极性比较小，哪位大侠能给个建议？
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x_iao_le x_iao_le

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1楼2011-10-06 04:20:53
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guihaishui

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
karl2100(金币+1): 谢谢！ 2011-10-08 00:07:13
karl2100:编辑内容 2011-10-08 00:07
克隆大虾(金币+10): tks 2011-10-08 12:31:00
1、点个薄层或换个HPLC试试，看看是不是HPLC出毛病了；
2、大孔树脂可以产生死吸附，是不是因为你的量小，损失掉了。
3、你先做个预实验看看结果：试试用少量的发酵液（HPLC可以检测到目标成分）上一个小点的大孔树脂柱，先用醇洗脱一下，在用丙酮洗脱看看能否检测到。上述仅供参考

哦，对了，不知你用的那种大孔树脂，是弱极性的，中极性的还行强极性的，按你说目标分子极性较小，该选择非极性或弱极性较好，当然中极性的大孔树脂也可以。

[ Last edited by karl2100 on 2011-10-8 at 00:07 ]
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相逢即缘
2楼2011-10-07 23:57:59
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by guihaishui at 2011-10-07 16:57:59:
1、点个薄层或换个HPLC试试，看看是不是HPLC出毛病了；
2、大孔树脂可以产生死吸附，是不是因为你的量小，损失掉了。
3、你先做个预实验看看结果：试试用少量的发酵液（HPLC可以检测到目标成分）上一个小点的大 ...

HPLC没问题，收菌之前检测过样品，再进HPLC还能检测到产物，唯独树脂吸附后，丙酮洗脱后，基本找不到产物了。可能变了？
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3楼2011-10-08 12:32:35
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guihaishui

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
qinhy(金币+1): 谢谢回帖~ 2011-10-08 20:13:48
克隆大虾(金币+10): tks,树脂名称为XAD-16,水洗完后，待水流进，直接用丙酮洗脱的,,,为何换用70-90%乙醇呢？ 2011-10-12 01:53:18
大孔树脂属于物理吸附，应该不会变。用的非极性还是中极性的大孔树脂？型号多少? 另外，换个洗脱剂试试（如70-90%的乙醇），是不是还没洗下来。
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相逢即缘
4楼2011-10-08 19:19:57
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by guihaishui at 2011-10-07 16:57:59:
1、点个薄层或换个HPLC试试，看看是不是HPLC出毛病了；
2、大孔树脂可以产生死吸附，是不是因为你的量小，损失掉了。
3、你先做个预实验看看结果：试试用少量的发酵液（HPLC可以检测到目标成分）上一个小点的大 ...

树脂名称为XAD-16...
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5楼2011-10-12 01:54:45
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小黑豆

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
karl2100(金币+1): 谢谢参与讨论！ 2011-10-12 23:51:04
克隆大虾(金币+2): tks 2011-10-13 18:41:27
建议洗脱的时候用TLC随时检验，如果没有，考虑样品中目标物量小，被树脂吸附，没有被洗脱
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6楼2011-10-12 22:58:11
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小黑豆 at 2011-10-12 15:58:11:
建议洗脱的时候用TLC随时检验，如果没有，考虑样品中目标物量小，被树脂吸附，没有被洗脱

我们一般用HPLC检测的，根据UV及保留时间及亮度，检测目标产物的。
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7楼2011-10-13 18:42:21
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guihaishui

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

克隆大虾(金币+8): tks,多谢... 2011-11-02 17:11:04
引用回帖:
4楼: Originally posted by guihaishui at 2011-10-08 19:19:57:
大孔树脂属于物理吸附，应该不会变。用的非极性还是中极性的大孔树脂？型号多少? 另外，换个洗脱剂试试（如70-90%的乙醇），是不是还没洗下来。

用水洗脱之后，就直接用丙酮洗脱目标物。。。。你们以前用过这种方法吗，可行吗。
如果没用过，我感觉由水直接过渡到丙酮，跨度太大。不如试试位于两者之间极性的洗脱剂，如如70-90%的乙醇。试试，看看怎么样。
另外，我们用过大孔树脂D101，用95%的乙醇去冲洗，一般可以将化合物全部洗下来。因此常在分离富集的最后一步使用
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相逢即缘
8楼2011-10-16 23:39:28
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sz168

禁言 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
9楼2011-11-05 16:47:51
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x_iao_le

银虫 (小有名气)
送红花一朵
我想问一下大孔树脂加在发酵液中一起摇菌发酵，那菌丝体和树脂怎么分的开啊，不会都缠在一起了吗，还有就是菌丝体会不会堵住树脂的控啊？
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10楼2013-12-30 19:25:39
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