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丁砣子

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[求助] 正丁醇部分上反相硅胶柱条件摸索

我现在有个样品是正丁醇部分上大孔树脂30%洗脱下来的部分，三个点，正相硅胶板跑的时候用的二氯甲烷-甲醇体系，比例2:1时，Rf值相差0.1左右，再加大比例就冲上去了，因为样品只有100mg左右，怕正相吸附严重，所以准备上个反相硅胶，请问一下各位大侠我这个适合甲醇-水系统梯度洗脱吗？还是不用梯度啊？或者说上葡聚糖凝胶更好？另外还有个问题，我的反相硅胶是20微米的，用直径1.5cm下面有筛板的柱子上行不？会不会堵到筛板里面啊？垫棉花有用没？问题有点多，请好心人帮帮忙，给我答疑解惑吧，谢谢啦！

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1楼 2011-10-03 11:40:39

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丁砣子

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引用回帖:

2楼: Originally posted by aj2003 at 2011-10-03 12:07:42:
可以用反相薄层板摸条件，不过我用的时候没有摸索过，就从10%左右梯度洗，看洗脱情况调整甲醇比例，反相柱子流速很慢，我一般都是加压走，即使这样周期也会很长，最好不要用带筛板的柱子，会更加慢，就用棉花。
...

我们实验室没有反相薄层板，用填料去铺的话我又怕倒来倒去损失多了，就那么点，我之前的样品一直是用醇溶的，也没具体统计过比例，我如果把样品挥干以后，再加甲醇-水，然后用使它溶解的这个比例作为第一个比例，是否可行呢？另外对洗脱剂梯度的跨度大小有要求没？用棉花硅胶不会从缝隙里面流出来吗？谢谢啦