24小时热门版块排行榜    

查看: 2238  |  回复: 16
本帖产生 2 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

西风的安逸

铜虫 (小有名气)

[求助] 反转录

反转录不是很容易成功么,可是为什么我最近做的反转录效果都很差呢,RNA跑的带很亮,浓度大概0.5~1ug/ul,这个浓度做反转录应该够了呀,而且RNA提完后马上就反转录了,条件是65度5分钟、42度1小时、85度5分钟,可是为什么就是没有cDNA呢,此问题急需得到解决,必当重谢!!!
回复此楼
既然选择了远方就要风雨兼程
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)

您好,我也想问一下,反转录42度30min还是50min好呢?
17楼2012-11-05 10:30:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 鼓励应助! 2011-10-02 14:14:07
所谓的没有cDNA是怎么看的呢?别告诉我是直接跑胶看
用cDNA作模板,内参基因能PCR扩增出来吗?这个是检验cDNA质量的常规方法。
2楼2011-09-30 23:45:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

447585565

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 鼓励应助! 2011-10-02 14:14:19
CDNA跑胶好浪费哦,没条带的话用测浓度的机子测一下吧。最好是扩下内参试试看。如果出不来的话,可以考虑下是不是做RT的时候试剂加漏了或者试剂有问题,如果是这样建议在左下反转录试试。
3楼2011-10-01 12:33:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tcd530

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

确定一下你的目的基因是否表达,目的RNA的丰度太低也是很难反转录出来的
4楼2011-10-01 21:04:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见