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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 第一次细菌质粒DNA 帮忙分析下 (*^__^*)
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nach

铜虫 (著名写手)

不让吃就去死
8楼解释的挺好的 听8楼的吧
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不让吃就去死
11楼2011-09-29 00:43:31
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另一个天堂

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

静海(金币+1): O(∩_∩)O谢谢 2011-10-01 12:50:56
引用回帖:
9楼: Originally posted by 静海 at 2011-09-28 23:46:07:
像图像中的出现的3条带，成分是这样的么？最快的是超螺旋、然后是开环DNA,再然后是线状DNA么？其中理想状态下出现的两条带中比较暗的应该是开环DNA么？^_^

超螺旋跑的最快，其次是线性DNA，最慢的是开环DNA。
理想的两条带，超螺旋浓度占70%以上，其余的是线性DNA
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12楼2011-09-30 14:28:32
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静海

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 另一个天堂 at 2011-09-28 11:57:16:
1.理想的条带是：两条，超螺旋的比较亮，另一条较暗
2.你的有3条带，应该是提取过程中DNA断裂了。而且有两条带浓度差不多（可能是震荡力度过大）
3.加溶液1、2、3的时候最好注意时间和力度

O(∩_∩)O谢谢~
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13楼2011-10-01 12:46:26
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静海

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yuxia82012 at 2011-09-27 23:19:27:
理想的话肯定是只有超螺旋啦，不过这个应该不影响使用的

你好，你看这样讲的通么？
1.关于那三条带：最快的那个是超螺旋，其次是环状，最慢的是基因组DNA。
2.从图中看到marker 跑的不是很好，不是marker的原因，电泳过程中有失误么？
3.看到条带有点散，是什么原因呢？加样量大？还是加样有问题？
O(∩_∩)O谢谢
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14楼2011-10-17 22:52:09
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qjy_134

铜虫 (小有名气)
做的还可以
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15楼2011-10-18 14:46:35
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fisheart

金虫 (小有名气)
其实第一个上样孔是有4条带的
由快到慢： 超螺旋， 开环， 复制中间体，大肠杆菌基因组DNA片段
碱法抽提质粒是得不到线性质粒DNA的，可以酶切电泳验证，条带位置是不一致的
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16楼2011-10-18 15:04:52
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09xdf

金虫 (著名写手)
请教：用碱法提取质粒DNA时，如果没有RNase A溶液，还能不能正常提取DNA， 另外，所配置的溶液1，2，3是否需要高温灭菌？即将第一次提取质粒DNA，很多问题都不懂，以前不是学生物的，希望大家帮忙给点意见，谢谢
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17楼2012-03-30 05:14:54
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joyfuldog

木虫 (职业作家)
分析的较透彻！有信息。
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18楼2012-04-02 00:06:21
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
4500706楼: Originally posted by 09xdf at 2012-03-30 05:14:54:
请教：用碱法提取质粒DNA时，如果没有RNase A溶液，还能不能正常提取DNA， 另外，所配置的溶液1，2，3是否需要高温灭菌？即将第一次提取质粒DNA，很多问题都不懂，以前不是学生物的，希望大家帮忙给点意见，谢谢

质粒DNA没有RNase也是可以提的。如果打算用来做PCR，也可以用。但是如果后续还打算做酶切，最好加RNase。
溶液1容易污染，最好高压灭菌下，不过我们经常不灭菌。但是，2和3是不能高压灭菌的，这个要注意哦。
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09xdf
19楼2012-04-02 11:29:14
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小小鸽飞

新虫 (小有名气)
传统方法比较费时，而且加溶液1、2、3时易出错，不妨试试用磁珠法提取效果很好，我就是用那个方法做的，跑出来的带还很好
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既然选择了远方，便只顾风雨兼程
20楼2012-04-02 14:12:30
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