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小娶个木

木虫 (正式写手)

BioEPI: 2
应助: 2 (幼儿园)
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红花: 15
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注册: 2011-03-28
性别: GG
专业: 环境化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+10, BioEPI+1): 2011-09-23 17:50:13

对了你是要中文版还是因为版本啊？算了，估计你还是小妹妹，还是给你发中文版吧，个人试验，若有误差，不怪我

二、水稻蛋白提取
样品处理：水稻根部及叶片部分
磨样：液氮保护下磨至细粉，分装至各离心管中，约2g；
蛋白提取：苯酚法
1、取分装好的样品约2.0g，加入EB1 6ml，PVPP 0.02g，PMSF 60ul，β-巯基乙醇120ul，Na3VO4、NaF 各6 ul；
注：
EB1: 0.7 M蔗糖、0.1 M的氯化钾、0.5 M Tris盐酸、10 mM EDTA，pH 7.5，
1%聚乙烯吡咯烷酮（PVPP），即(样品量的2%)2.0*1%=0.02g;
1mM  PMSF：用异丙醇配制成100mM 母液贮存于冰箱中锡箔纸待用，每次用完即扔掉，用时根据EB1的总体积进行稀释，如本例中为6ml，则取母液60ul 加入到离心管中，则浓度为60*100/6000=1mM
2 %的β-巯基乙醇（β-mercaptoethanol）（v/v）：如本例中EB1 为6ml，则6*2%=120ul
0.2mM Na3VO4：配成0.2mmol/ml 母液，用时稀释即可，称取Na3VO4  0.03678g溶于1ml水，此时母液浓度为0.2 mmol/ml，如本例中EB1 为6ml，则需取6ul，6*0.2/6=0.2 mM
1 mM NaF：配成1mmol/ml 母液，用时稀释即可，称取NaF  0.042g溶于1ml水，此时母液浓度为1mmol/ml，如本例中EB1 为6ml，则需取6ul，6*1/6=1mM
2、低温斡旋10min（用冰盒保持温度在较低温度）
3、取出，加入水饱和苯酚6ml，同步骤2，低温斡旋10min，
4、用EB1 配平各管，在T=4℃，10000g 条件下离心40min；
5、将上层酚相吸出至另管中，加入5倍体积醋酸铵饱和甲醇溶液，置于-20℃冰箱过夜沉淀，
6、次日取出，配平后同样条件下离心40min，弃掉上清液，用冷丙酮清洗三遍，前两遍离心10min，后一遍离心20min，用氮气吹干待用
这是我试验本上的  一个字一个字帮你打印出来了

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追梦的人1987

办法总比困难多

5楼2011-09-22 11:05:36

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