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小木虫论坛-学术科研互动平台» 网络生活区» 有奖问答 » 有奖问答中转子版 » 【求助、交流】如何提高 实时荧光定量PCR 标准曲线的扩增效率
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chenbz

银虫 (初入文坛)

[求助] 【求助、交流】如何提高 实时荧光定量PCR 标准曲线的扩增效率

最近在做实时荧光定量PCR，做的是绝对定量。在做标准曲线时，扩增效率不高，怎么提高扩增效率？
采用的是三步法，95°，30s，95°，10s，60°，30s，72°，30s。
扩增片段514bp，
扩增体系：SYBR Green 12.5，primer 2，ddH2O 9.5，模板 1。
试剂是TaKaRa的，R方0.998，扩增效率很低，不知该如何提高？
提高引物的浓度是试过了，还是不行，模板是提取的质粒稀释的梯度（1~7次方），请求各位高手指点，谢谢谢！！！！
扩增效率影响的因素有哪些？操作过程中有啥需要特别注意的地方没？
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干一行爱一行，方能有所施展；做一事成一事，乃为有用之才！
1楼 2011-09-21 11:16:21
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zhenyanxu219

新虫 (初入文坛)
我的也是这种情况，同楼主一起期待求助，时刻关注！
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2楼2011-09-21 13:46:58
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双螺旋DNA

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

打TaKaRa的8008909508问一下
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3楼2011-09-21 13:57:37
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