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匿名

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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

问这个问题的同学还挺多

1. 提取的RNA要测定浓度,然后稀释到一致的浓度
2. 反转录用等量的RNA(之所以稀释RNA,是为了在反转录时减小加样误差,你加1uL和加5uL,同样0.2uL的误差,百分比就差的很多了)
3. PCR时取等量的cDNA(可以稀释一下cDNA,增加加样体积,减少误差)

要注意PCR仪的扩增效率,如果PCR仪各孔之间的效率差很多的话,需要先校正PCR仪。
22楼2014-05-18 20:16:18
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athenawj

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by facingworld at 2011-09-19 20:10:34:
各位大侠,我要做半定量PCR,可是各个组织内参的条带亮暗程度相差太大了,怎么办,我试过PCR的时候将模板的量改变,可是还是跑电泳后还是不行,我该怎么办,才能把这各个组织的内参的条带调到一样亮呀????这个 ...

RNA提取后计算浓度后,等量反转后内参应该会齐了
3楼2011-09-19 20:35:16
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匿名

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4楼2011-09-19 20:48:33
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临风7071

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by facingworld at 2011-09-20 09:56:37:

那在调整上样量,使其一致,这样也可以的
6楼2011-09-20 11:32:24
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