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匿名

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1楼2011-09-19 20:10:34

已阅同方向广播申请MolEPI 回复此楼编辑查看我的主页

wangpeng227

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

问这个问题的同学还挺多

1. 提取的RNA要测定浓度，然后稀释到一致的浓度
2. 反转录用等量的RNA（之所以稀释RNA，是为了在反转录时减小加样误差，你加1uL和加5uL，同样0.2uL的误差，百分比就差的很多了）
3. PCR时取等量的cDNA（可以稀释一下cDNA，增加加样体积，减少误差）

要注意PCR仪的扩增效率，如果PCR仪各孔之间的效率差很多的话，需要先校正PCR仪。

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22楼2014-05-18 20:16:18

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athenawj

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

1楼: Originally posted by facingworld at 2011-09-19 20:10:34:
各位大侠，我要做半定量PCR，可是各个组织内参的条带亮暗程度相差太大了，怎么办，我试过PCR的时候将模板的量改变，可是还是跑电泳后还是不行，我该怎么办，才能把这各个组织的内参的条带调到一样亮呀？？？？这个 ...

ＲＮＡ提取后计算浓度后，等量反转后内参应该会齐了

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3楼2011-09-19 20:35:16

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