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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 【求助】反相C18层析柱怎样装柱，使用的问题
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虹色小兔

新虫 (初入文坛)

[求助] 【求助】反相C18层析柱怎样装柱，使用的问题

各位虫友：我准备使用C18反相填料柱层析分离，但不知道怎样处理填料，装柱，上样和洗脱，使用普通玻璃柱是否可行，求大侠帮助一下哈？越详细越好，多谢多谢啦
洗脱时可以用水直接冲吗？谢谢大家啦
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1楼 2011-09-16 10:52:38
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虹色小兔

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 虹色小兔 at 2011-09-16 10:52:38:
各位虫友：我准备使用C18反相填料柱层析分离，但不知道怎样处理填料，装柱，上样和洗脱，使用普通玻璃柱是否可行，求大侠帮助一下哈？越详细越好，多谢多谢啦
洗脱时可以用水直接冲吗？谢谢大家啦

谢谢大虾，那上样量有规定吗
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4楼2011-09-16 15:58:50
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rainbowseer

铁虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
qinhy(金币+1, PhEPI+1): 多谢回帖~ 2011-09-18 20:52:16
我们买的C18反相填料是用80%甲醇搅匀，上到玻璃柱上，如果你的压力太大，不能用玻璃的，最好不要用水冲，这个需要你问下供应商，有的用水冲会导致填料上基团的塌陷，小心点的话，至少5%甲醇，最高就用80%甲醇，如果想不在这个范围，可以问问供应商。质量好的，可以水冲，甲醇冲得吧。
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2楼2011-09-16 14:06:29
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syhorchid

木虫之王 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

★
虹色小兔(金币+1): 谢谢 2011-09-16 15:56:09
qinhy(金币+1): 多谢回帖~ 2011-09-18 20:52:21
C18反相填料柱层析分离，先用甲醇处理填料、装柱（可以使用普通玻璃柱装柱），用较低浓度的甲醇水溶液平衡柱子，再上样、洗脱。
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syhorchid
3楼2011-09-16 14:10:11
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ningda47

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
qinhy(金币+1, PhEPI+1): 多谢回帖~ 2011-09-18 20:52:29
一. 操作步骤：
用反相板点板确定洗脱比例（必要的时候用梯度洗脱）
样品过滤
甲醇冲洗柱子
用水冲洗柱子
用尽量少的溶剂溶解样品，上样.
用已经确定好的洗脱剂洗脱
甲醇冲洗柱子

二 注意事项：
1.  一般只用“甲醇-水”系统
2.  梯度洗脱时一定要从极性大的逐步换到小极性的溶剂.
3.  不要让柱子干掉，要让其完全浸泡在溶剂之中。
3.  溶剂极性转换时跨度不宜过大，以免放热产生气泡.
4. 反相柱的装填一般用甲醇装柱，有条件的话可以尽可能的在高流速下压一下柱床，这样柱效好一些。
赞一下(4人) 回复此楼
路是自己选的，就是爬着也得到终点，坚持、加油！
5楼2011-09-18 19:53:26
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