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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于链霉菌文库筛选的困惑 真的好纠结啊
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syn1985

木虫 (正式写手)

[求助] 关于链霉菌文库筛选的困惑 真的好纠结啊

前一段时间在一家公司建了链霉菌的fosmid基因组文库，现在在用自己的特定引物筛选含有目的基因的克隆，筛选发现这个基因几乎是每个保菌板（384孔板）里面都有，我在第一个384孔板里就筛到了6个阳性克隆，其他的都不知道怎么办了，实在是太多了。
这个基因是合成一类化合物里面的一个比较保守的基因，现在我在纠结，因为一个克隆测序要花1-2万，不可能把所有的都测序，但是如果吧所有的都找到然后挑选也很麻烦，因为实在是太多，可是又纠结于自己从已经筛到的6个克隆里面挑一个万一不是我目的化合物的基因那可怎么办？
不知道哪位虫子有好点的主意 ，小妹在此谢过
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1楼 2011-09-02 14:08:41
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syn1985

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 瓶儿花 at 2011-09-02 20:31:50:
PCR不一定很准确的，会出现假阳性的情况，Southern杂交的话你可以去看一下有关的文献，像做基因调控的学者一般都是用这种方法筛选到自己的目的基因的。

但是我的克隆太多 有2万个 如果做southern的话成本高和效率低 两者结合应该不错吧
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5楼2011-09-03 15:53:47
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瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

syn1985(金币+3): 谢谢 2011-09-02 16:25:17
设计探针，做Southern 杂交
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2楼2011-09-02 14:45:05
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syn1985

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 瓶儿花 at 2011-09-02 14:45:05:
设计探针，做Southern 杂交

我没做过杂交 我有点不明白这杂交的结果会和我PCR的结果有多大的差别呢？
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3楼2011-09-02 16:25:51
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瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

syn1985(金币+7): 5 2011-09-03 15:53:54
PCR不一定很准确的，会出现假阳性的情况，Southern杂交的话你可以去看一下有关的文献，像做基因调控的学者一般都是用这种方法筛选到自己的目的基因的。
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4楼2011-09-02 20:31:50
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