24小时热门版块排行榜    

查看: 1734  |  回复: 9

syn1985

木虫 (正式写手)

[求助] 关于链霉菌文库筛选的困惑 真的好纠结啊

前一段时间在一家公司建了链霉菌的fosmid基因组文库,现在在用自己的特定引物筛选含有目的基因的克隆,筛选发现这个基因几乎是每个保菌板(384孔板)里面都有,我在第一个384孔板里就筛到了6个阳性克隆,其他的都不知道怎么办了,实在是太多了。
这个基因是合成一类化合物里面的一个比较保守的基因,现在我在纠结,因为一个克隆测序要花1-2万,不可能把所有的都测序,但是如果吧所有的都找到然后挑选也很麻烦,因为实在是太多,可是又纠结于自己从已经筛到的6个克隆里面挑一个万一不是我目的化合物的基因那可怎么办?
不知道哪位虫子有好点的主意 ,小妹在此谢过
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

syn1985(金币+3): 谢谢 2011-09-02 16:25:17
设计探针,做Southern 杂交
2楼2011-09-02 14:45:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syn1985

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 瓶儿花 at 2011-09-02 14:45:05:
设计探针,做Southern 杂交

我没做过杂交 我有点不明白这杂交的结果会和我PCR的结果有多大的差别呢?
3楼2011-09-02 16:25:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

syn1985(金币+7): 5 2011-09-03 15:53:54
PCR不一定很准确的,会出现假阳性的情况,Southern杂交的话你可以去看一下有关的文献,像做基因调控的学者一般都是用这种方法筛选到自己的目的基因的。
4楼2011-09-02 20:31:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syn1985

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 瓶儿花 at 2011-09-02 20:31:50:
PCR不一定很准确的,会出现假阳性的情况,Southern杂交的话你可以去看一下有关的文献,像做基因调控的学者一般都是用这种方法筛选到自己的目的基因的。

但是我的克隆太多 有2万个 如果做southern的话成本高和效率低 两者结合应该不错吧
5楼2011-09-03 15:53:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瓶儿花

金虫 (小有名气)

Southern杂交效率很高的。
6楼2011-09-03 18:25:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

fosmid 末端测序..
7楼2012-06-12 20:03:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuhua759

捐助贵宾 (著名写手)

先多筛一些,然后提取fosmid质粒,酶切分析各fosmid的关系。然后选择代表性的fosmid进行末端测序。同时先可以敲除这个基因,以验证其的作用。
8楼2012-06-21 18:26:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syn1985

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4609740楼: Originally posted by shuhua759 at 2012-06-21 18:26:48
先多筛一些,然后提取fosmid质粒,酶切分析各fosmid的关系。然后选择代表性的fosmid进行末端测序。同时先可以敲除这个基因,以验证其的作用。

我已经做完了 谢谢
9楼2012-06-21 20:21:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Z_Eira

新虫 (初入文坛)

想问楼主一个小白的问题,怎么减少384孔板里复孔间的差异啊
10楼2016-10-16 19:46:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 syn1985 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 5/250 2026-09-02 22:50 by rM1TE0WVDIIY
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 3/150 2026-09-02 22:50 by rM1TE0WVDIIY
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +7 瞬息宇宙 2026-09-01 14/700 2026-09-02 17:33 by ma0526
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
信息提示
请填处理意见