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1289622

木虫 (正式写手)

[求助] 血浆蛋白沉淀问题

血样品处理过程,蛋白沉淀与药物提取如何操作,是先沉淀蛋白还是提取药物?若用乙腈沉淀蛋白,乙腈-乙酸乙酯(30:70)提取药物该怎样操作?乙腈-乙酸乙酯(30:70)会溶解蛋白吧?!
   乙腈-乙酸乙酯(30:70)提取药物离心后,上清液要全部取完吗,比如离心后上清液6ml,只取5ml,每次平行操作这样可以吗?

[ Last edited by 1289622 on 2011-9-1 at 17:25 ]
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毛毛宝贝

金虫 (初入文坛)

而我想知道的是怎样的溶剂可以溶解极性小的药物而又不沉淀蛋白且可以直接进液相
11楼2012-04-21 13:06:05
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破土草儿

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by 1289622 at 2011-09-01 17:11:11:
血样品处理过程,蛋白沉淀与药物提取如何操作,是先沉淀蛋白还是提取药物?若用乙腈沉淀蛋白,乙腈-乙酸乙酯(30:70)提取药物该怎样操作?乙腈-乙酸乙酯(30:70)会溶解蛋白吧?!
   乙腈-乙酸乙酯(30:70)提取 ...

一般先用有机溶剂或者盐沉淀蛋白,再萃取药物。具体做法,往血浆(血清)中添加纯有机溶剂(或者一定浓度的盐,如乙腈)同时添加一些酸(或者碱,为了增加药物在有机相中的溶解率),涡旋离心,再添加萃取剂(如乙酸乙酯,或者转移上清液后,添加萃取剂萃取涡旋离心,可以不必全部吸取上清液,只要记住吸取溶液的体积和开始蛋白沉淀时溶剂的体积就行),之后吸取部分上清液,直接进样或者复溶进样。
2楼2011-09-02 22:53:28
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1289622

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 破土草儿 at 2011-09-02 22:53:28:
一般先用有机溶剂或者盐沉淀蛋白,再萃取药物。具体做法,往血浆(血清)中添加纯有机溶剂(或者一定浓度的盐,如乙腈)同时添加一些酸(或者碱,为了增加药物在有机相中的溶解率),涡旋离心,再添加萃取剂(如乙 ...

大侠,蛋白沉淀和药物提取这个过程我还不是太明白,能不能说的具体点,举个例子吧。

还有个问题要请教,静脉给药后,第一个采药点的时间怎样定?有的时给药后2min,有的5min、10min,怎样确定呢?有什么依据?一般是多长时间?
3楼2011-09-04 20:33:49
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破土草儿

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1289622(金币+2, 博学EPI+1): 2011-09-05 17:52:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by 1289622 at 2011-09-04 20:33:49:
大侠,蛋白沉淀和药物提取这个过程我还不是太明白,能不能说的具体点,举个例子吧。

还有个问题要请教,静脉给药后,第一个采药点的时间怎样定?有的时给药后2min,有的5min、10min,怎样确定呢?有什么依据? ...

你好,我也不是什么大侠,都是同辈。蛋白沉淀就是把血浆(或者血清)里头的蛋白沉淀下来,方法就是加有机溶剂使蛋白沉淀,“有些情况下”,上清液可以直接上液相(需过滤膜,当然高速离心如一万二可以不过膜,或者吸取上清液干燥复溶,复溶的目的1、萃取,2、增加浓度)。液液萃取就是涡旋离心,使一部分血液内源性物质不萃取,而目标化合物可以萃取在有机相中,原理为有机相是蛋白质变性沉淀,同时根据相似相容原理萃取目标分析物,直接吸取萃取部分上样或者复溶。记住,请回头看,我打引号的有些情况下部分,对于一些物质,直接用蛋白沉淀,内源性杂志很多,导致“基质效应”太大,而单独用液液萃取,可能回收率太低,所以在一些文章中,将液液萃取和蛋白沉淀两者结合起来用。这个我想我说明白了,还不明白自己找一篇中文或者英文的相关文献,看样品制备部分就能够理解我所说的意思了。
对于你第二个问题,你看过药时曲线(血药浓度-时间),只要保证有先上升后下降形状就行,当然由于有些药物分布太快,只能看到下降的部分,那你就尽量早取血,不必拘泥于2min或者5min之类,只要能够保证有上升和下降就好了,当然只有下降部分,也可以。希望你能够明白了!
4楼2011-09-04 21:56:33
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