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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DH5a摇菌的OD值问题
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mengxibio

新虫 (小有名气)

[交流] DH5a摇菌的OD值问题 已有10人参与

用DH5a制作感受态细胞，用OD值检测是否到达对数期，OD值多少合适？
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1楼 2011-08-31 14:19:32
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
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dhd997(金币+1): 2011-08-31 17:03:16
需要DH5a处于对数生长周期中期，一般OD600在0.4-0.5之间比较合适
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2楼2011-08-31 15:22:28
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铅钋锶钇

银虫 (初入文坛)
★
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一般说不要超过0.4
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3楼2011-08-31 16:48:32
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辉辉集团

银虫 (正式写手)
0.5左右差不多吧
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4楼2011-08-31 16:58:18
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)
★
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0.5-0.7之间，关键是在后面的处理！
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我选择，我喜欢；我喜欢我的选择。
5楼2011-08-31 17:22:01
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★
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amisking(金币+4): 鼓励应助 2011-08-31 20:07:26
这个跟以下几个因素有关
1.培养基成份
2.摇瓶形状
3.摇床转速
以LB培养基、普通三角摇瓶、250rpm转速为例，A600 1.2以下时菌体都处于对数生长期；
影响菌体快速生长的因素主要有以下几个方面
1.营养
2.溶氧
3.代谢废物
LB培养基可以支持DH5a长到A600在5左右，在摇瓶水平上不会出现代谢物抑制，因此使菌体退出对数生长期的因素只有溶氧不足这一个
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6楼2011-08-31 19:05:52
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nach

铜虫 (著名写手)

不让吃就去死
0.6-0.8
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不让吃就去死
7楼2011-08-31 20:07:09
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萝卜丝儿

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2): good 2011-09-01 06:59:44
要看你用什么protocol来做了，我们实验室用的那个protocol上说OD在0.3-0.5之间适宜。还有做感受态细胞每一步都很重要，所以都不能懈怠。
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好好学习，天天向上！
8楼2011-08-31 21:46:54
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475502411

铜虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+5): 最近很活跃啊，加大奖励 2011-09-01 06:59:58
100ML的LB肉汤，在1000ML的锥形瓶摇，OD600是0.4 左右，因为做感受态的OD值最好控制在0.6以下。而在冰浴的过程中，操作的过程中，细菌还会长，并且这个时候正好处于对数生长期，细菌生长特别快，所以OD为0.4左右的时候就开始准备做，这样的感受态比较好。摇菌的时候一定要用大一点的锥形瓶，这样营养比较均匀，有利于菌体的生长
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
9楼2011-08-31 21:59:43
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cyzhgt

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+3): Good 2011-09-01 18:10:27
由于未明原因，在大肠杆菌的生长曲线上有两个时期的大肠杆菌可以有较高的转化效率，一个是在出去（OD600=0.4）（Hunahan 1983），另一个在末期（OD600=0.95）（Tang et al. 1994）。前期收获的菌容易有效是因为它的高转化率能持续时间更长，而后期的生长峰较陡峭，在收集细菌时若耽误2-3min，将会使转化效率较低一个数量级。——分子克隆实验指南第三版第90页。
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10楼2011-09-01 09:32:41
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