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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 求助 土壤基因组 PCR 扩增问题已有15人参与

跟很多人一样 做的是土壤微生物多样性
这里,我觉得有一个很大的瓶颈 就是提取基因组之后的PCR扩增问题。因为后面的所有分子水平的分析都建立在PCR 扩增的基础上。可是 我做了很久,这个扩增效果总是不理想。
在此发帖,希望做类似工作的 能够将自己在实验过程中的心得一一列举出来 不论什么因素 只要是自己觉得影响pCR 效果的 都列举出来吧,毕竟 经验这东西 还是很重要的 希望大家不吝赐教,我们一相互讨论。
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lethebai

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
老夏853: 回帖置顶 2012-10-25 16:03:20
引用回帖:
1001142楼: Originally posted by cexoihtydx at 2011-09-03 13:51:39
1 土壤宏基因组提取,腐质酸对后续PCR影响较大,没有比较好的解决办法。
2 我们组有中国70多个不同地理环境采集的土壤,土壤DNA做PCR时模板投入量常为20 ng每50 ul反应体系。
3 引物的种类不同,差异也很大。我们 ...

请问高手有提过红土的DNA吗?我现在用mobio的powersoil来提,但总是有浓度跑不出条带,求指教O(∩_∩)O~
30楼2012-10-25 13:55:17
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

希望做这块的虫子们 都能出来交流交流
2楼2011-08-30 14:20:59
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

就真的没有人愿意出来交流一下吗
3楼2011-08-30 19:36:40
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翰章

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-08-31 07:40:41
主要是无菌操作;Tm值的确定及时间的确定,以及延伸时间的确定;可以做模板浓度梯度和Tm温度梯度,希望你实验顺利。
4楼2011-08-30 22:40:48
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