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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] HRP标记DNA 已有1人参与

有没有人做过将HRP标记到DNA上的实验啊?有没有具体步骤啊?
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zsy1106

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
amisking(金币+3, BioEPI+1): 鼓励应助 2011-08-25 19:21:03
标记之后是想做杂交么?凡是涉及到杂交的话,把蛋白标记到HRP的过碘酸钠法恐怕不行,因为单链DNA上的-NH2不能用来标记,这很容易想,因为这样标记容易使整条DNA趴在HRP上,而且-NH2被用掉了,就不能在互补链的配对中形成氢键了。
个人觉得比较好的做法是在DNA和HRP之间搭个“桥”,就是在引物或者探针的末端做修饰,比如可以加个生物素,同时把链亲合素标记到HRP上,然后通过生物素-链亲和素把引物和HRP偶联(换成FITC和FITC的抗体之类的也行);或者在引物或探针末端修饰-SH,再通过SMCC标记到HRP的-NH2上,方法很多的。看你的实验目的选择最好方案吧。

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2楼2011-08-25 17:08:00
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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

送鲜花一朵
谢谢你的解释,很详细,我学到了很多,多谢多谢!
3楼2011-08-25 21:24:35
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gloryping

铁杆木虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by zsy1106 at 2011-08-25 17:08:00:
标记之后是想做杂交么?凡是涉及到杂交的话,把蛋白标记到HRP的过碘酸钠法恐怕不行,因为单链DNA上的-NH2不能用来标记,这很容易想,因为这样标记容易使整条DNA趴在HRP上,而且-NH2被用掉了,就不能在互补链的配对 ...

O(∩_∩)O谢谢
4楼2011-08-25 22:18:59
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