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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白浓缩
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beiju

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白浓缩

冷冻干燥浓缩蛋白和PEG浓缩蛋白 有什么区别 哪个失活率比较高
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xhjggl

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1楼 2011-08-17 10:08:21
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wxy007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
beiju(金币+3): 2011-08-18 10:01:59
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-08-19 18:20:19
如果你的蛋白对温度很敏感的话，冷冻干燥效果比较好，PEG操作比较麻烦，并且失活率较高。
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生活充实，努力精彩！
2楼2011-08-17 10:58:02
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394216087

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
beiju(金币+5): 2011-08-18 10:02:14
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-08-19 18:20:41
silicare(BioEPI+1): 2011-11-24 08:45:06
具体方法百度一下就可以知道。简单来说，冻干法适用于几乎所有蛋白，她的原理是低温低压条件下液体水相直接升华成气相，仪器设备要求高，处理量受限制。而PEG法主要是通过半透膜的原理来达达浓缩的效果，这个方法简单，但是蛋白黏附在膜上回收麻烦，当浓缩体积很小时，损失率会很高。如果是常规的浓缩，建议用PALL的超滤离心管，有很多规格的；大量体积处理的时候用MILLI PORE的PELICON系列产品。
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Notino
3楼2011-08-17 13:27:15
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imfly77

木虫 (小有名气)
★ ★
adslye(金币+2): 感谢提醒~鼓励交流~ 2011-09-29 13:38:40
引用回帖:
3楼: Originally posted by 394216087 at 2011-08-17 13:27:15:
具体方法百度一下就可以知道。简单来说，冻干法适用于几乎所有蛋白，她的原理是低温低压条件下液体水相直接升华成气相，仪器设备要求高，处理量受限制。而PEG法主要是通过半透膜的原理来达达浓缩的效果，这个方法 ...

用过Millipore的浓缩柱（好像是叫Amicon），效果还不错。
冷冻干燥有时候也会把蛋白质弄失活（比如我以前做的一个脂肪酶）。
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4楼2011-08-17 13:39:45
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394216087

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢交流 2011-08-19 18:21:07
beiju(金币+2): 2011-08-20 20:39:51
引用回帖:
4楼: Originally posted by imfly77 at 2011-08-17 13:39:45:
用过Millipore的浓缩柱（好像是叫Amicon），效果还不错。
冷冻干燥有时候也会把蛋白质弄失活（比如我以前做的一个脂肪酶）。

Amicon是属于超滤离心管类的吧，这类产品很早就出来，pellicon系列是属于膜包超滤装置，采用比较新潮的切向流技术，给我感觉还行。
冷冻干燥法应用不当肯定是会把蛋白灭活的，关键是你的冻干曲线是否已经验证得当。
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Notino
5楼2011-08-19 17:21:11
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jbgdyy

木虫 (正式写手)
超滤管损失大，膜包超滤要大量的，少量的怎弄呢
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6楼2011-08-30 16:00:28
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 感谢交流~~ 2011-09-29 13:38:54
silicare(BioEPI+1): 2011-11-24 08:46:13
我最近做的一个酶，在水溶性中和咪唑盐存在的情况下不太稳定，PEG浓缩试过，超滤管也试过，觉得超滤管蛋白损失太大了，PEG浓缩的话析出沉淀太多，我就直接把透析完的蛋白（一般100多ml）直接冻干，效果还挺好的。
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人生百态原为海，看破红尘方为岸！
7楼2011-08-31 16:23:58
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四环冻干机

新虫 (初入文坛)
★ ★
adslye(金币+2): 鼓励新虫交流~ 2011-09-29 13:39:09
冷冻干燥的方法肯定要好，低温干燥本身就是能很好的保持样品的生化特性，复水性强，活度高。主要是看你的冻干工艺的设定与摸索。我是四环冻干机上海办的，我的很多用户都是冷冻干燥方法来处理蛋白。效果都很好的。
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生化科学仪器
8楼2011-09-29 10:03:14
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tianmaxk

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 394216087 at 2011-08-19 17:21:11:
Amicon是属于超滤离心管类的吧，这类产品很早就出来，pellicon系列是属于膜包超滤装置，采用比较新潮的切向流技术，给我感觉还行。
冷冻干燥法应用不当肯定是会把蛋白灭活的，关键是你的冻干曲线是否已经验证得 ...

我想问问，我们冻干都是直接冻干的，没做过什么曲线啊？我最近想浓缩一个蛋白呢。。也打算冻干一下，不过现在心理也打鼓了~
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享受美丽人生
9楼2011-11-22 09:25:13
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xhjggl

木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
也可以使用美国生产的活性保持型沉淀式试剂盒，产品编号786-125
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10楼2011-11-23 21:23:09
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