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要扩一个567的条带，之前已经有人尝试过很多条件，但都没扩出来，我在他们的基础上又做了很多次，最近有一次做出来，目标条带比较弱，引物二聚体很亮，因为只是想做个基因分型，所以对条带要求不是太高，就投入了正式试验，但是后来的结果非常不稳定，条带时有时无，向各位大侠请教！ 20ul体系试剂量（ul） ddH20 13.4 10X buffer 2 25mM MgCl2 1.2 10mM dNTPs 0.4 10 uM primer F1 0.4 10 uM primer R2 0.4 Taq (Promega)（5U/ul） 0.2 96°C 4min 95°C 45s 58℃ 45s 30cycles 72°C 45s 72°C 7min 下面一张是开始摸条件时候，条带比较弱，但还能看得见。  下面的是正式分型，就没做出来，重复了很多遍，有时有一两个，有时又没有，同样的模板，有时有有时又没有。  今天把循环加到35次，还是没有做出来。  [ Last edited by 超级小葵 on 2011-8-16 at 14:22 ] |
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