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金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
rainwander(金币+4): 鼓励交流 2011-08-17 07:12:50
04swlxy(金币+10): 回帖很仔细,内容很有用 2011-10-21 19:55:07
zhang8826857(MicEPI+1): lz反馈很有用,奖励EPI一个^_^继续努力啊^_^ 2011-10-22 10:29:16
采集气管粘液或泄殖腔粘液,或病变组织(呼吸道、消化道),加纯水制作匀浆(10%悬液),低速冷冻离心机(台式或立式均可)3,000~4,000rpm, 4℃~5℃,15~20分,弃沉淀,即得到粗制的病毒液,可用负染法处理(用毛细管吸取悬液,滴在带有支持膜的铜网上,根据悬液内样品的浓度可立即或放置数分钟后,用滤纸从液珠边缘吸去多余液体,然后滴上负染液(常用重金属盐配置:如PTA(磷钨酸)、KPT(磷钨酸钾)、NaPT (磷钨酸钠)、醋酸钠、甲酸钠、钼酸铵等等)、染色时间1~2分钟,然后用滤纸吸去染液,待干燥后上透射电镜观测。如果粗制液中病毒成份极少,透射电镜观测不到,则可把悬液用离心浓缩仪浓缩;或用超速离心机,固定角式转头40,000rpm ×45 分钟,5℃取沉淀制成悬液上电镜观测。或用40,000rpm的甩平转头,30%~50%W/W 线性蔗糖梯度32,000rpm×50 分,5℃,病毒集聚在1.15~1.18g/cm3之间的某个位置形成纯样品区带;或用Ficoll,30%~40%W/W 线性梯度,病毒沉降在1.13~1.15g/cm3之间;或用Percoll作平衡等密度离心,自形成梯度,病毒悬液与Percoll混合,初始密度1.05g/cm3,用0.01M Tris-HCL作渗透平衡液,日立超速离心甩平转头P28S(上海天美肯公司购自)或SW28(贝克曼)转头,20,000rpm×30分钟,5℃。病毒在1.06 g/cm3附近形成纯样品区带。当然,也可以用溴化钠(钾)或碘化钠(钾)梯度进行禽流感病毒的纯化。
2楼2011-08-16 13:47:10
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