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yixindejia

新虫 (初入文坛)

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[求助] 时间分辨荧光分析

请教各位高手，有没有做过时间分辨荧光分析的详细步骤和注意事项，越详细越好，谢谢啦!（主要是仪器操作）

[ Last edited by yixindejia on 2011-8-11 at 22:39 ]

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1楼2011-08-11 22:38:04

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qingwa59

木虫 (小有名气)

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专业: 法医毒理、病理及毒物分析

我在网上找来的，你看看能不能用

一〉开机顺序：

（1）开机前首先确认主机两个开关：POWER/MAIN均处于关闭状态（搬向O处）。先接（2）通电源开关（POWER），5秒钟后再按下氙灯点灯按钮，当氙灯点燃后

（3）再接通主开关（MAIN）。此时主开关上方绿色指示灯连续闪动三下。, v＊ L;

（4）接通电脑及打印机电源，Win98开始建立，随后F-4500操作界面自动进入。
（5）按界面提示选择操作方式。
〈二〉  关机顺序：
（1）逆开机顺序实施操作。
（2）当电源开关关闭后5秒钟，再次接通10分钟.目的是仅让风扇工作，使灯室散热）最后关闭电源开关。
〈三〉  操作界面介绍：# G& t; i$ ?! v0 V- s- s8 ^
（1）当前显示的画面为模拟画面，即观测样品峰用。. j! x'' |7 M0 u! X! ]: |# L
（2）在模拟画面右侧，是仪器当前状态显示。它给出了当前的信号能量值，激发和发射波长及狭缝值，光闸（Shutter）开/关状态等。# p V O0 w5 e1 v
（3）显示屏最上一行为八个菜单杆，分别为 File /Edit /View /Spectrophotometer /Tools /Utility /Window /Help。每个菜单杆下均有子目录，供用户选用。! ] r8 q/ r. w9 p1 |, }
（4）为了方便用户操作，将常用的子目录演变为 23 个带彩图的快捷工具栏，用户随意点击后，操作界面立即更换，非常便利。该 23 个快捷栏分布在显示屏的上方及右方，非常醒目。4 |＊ z& y# ?9 E4 k0 ]
〈四〉  波长扫描的简易操作：（Wavelength Scan）& ^" ]$ M: e+ k2 J$ w- I7 v
点击快捷栏“Method” 后，立即显示了分析方法（Analysis Method）的五个重叠界面分别为

“常规”（General），

“仪器条件”（Instrument），

“模拟画面”Monitor，

“处理”Processing，

“报告”Report。

下面详细介绍每个界面：
（1）General （常规）
＊Measurement （测量方式）－－－－－－－－选择Wavelength （波长扫描）
＊Operator    （操作者名）－－－－－－－－-键入人名
＊Instrument    仪器型号－－－－－－－－－－自动给出 Q t- q" T0 _4 ^
＊Sampling    样品名称－－－－－－－－－－
＊Comments    注释表－－－－－－－－－－－－－－可输入简单说明
＊Load       装载－－－－－－－－－－－－－－－－调用已存入的条件
＊Save       存入－－－－－－－－－－－－－－－－-存储现有的条件
＊Save As    （另存）－－－－－－－－－－－－－－另存现有的条件
（2）Instrument （仪器条件）
＊Scan  mode 扫描方式－－－－－－－－－－ Excitation    激发波长扫描, y4 J  H4 z! T8 T/ r9 |
Emission    （发射波长扫描） E4 u; W- K: c4 n. g'' K
Synchronous （同步扫描）

＊Data  mode  （数据方式）－－－－－－－－-Fluorescence （荧光采集）
         ,;                Luminescence  （发光采集）

Phosphorescence（磷光采集）

＊EM  WL （发射波长）－－－－－－－－-输入范围 200nm―900nm

＊EX Start WL  （激发起始波长）－－－－输入范围  200nm—890nm6 J- o1 ?9 Y8 J9 B+ N: c
＊EX End WL （激发终止波长）－－－－-输入范围  210nm—900nm
＊EX WL 激发波长－－－－－－－－－－－－-输入范围  200nm—900nm
＊EM Start WL  （发射起始波长）－－－－-输入范围  200nm—890nm- _5 |1 ` l7 G7 X/ }5 D/ ＊EM End WL （发射终止波长）－－－－-输入范围  210nm―900nm$ J M0 S1 }% P, F. _5 ~
＊Scan speed （扫描速度）－－－－－－－－－－-15,60,300,1200,2400,12000,30000nm/min

六挡可选（磷光扫描：15,60,240nm/min）
＊Delay       （延迟时间）－－－－－－－－－－－－输入范围  0¬―99秒（启动后延迟测量）
＊EX  Slit    （激发单元狭缝）－－－－－－-1.0, 2.5 ,5.0, 10.0, 20.0五挡可选。6 } Y3 ＊EM  Slit    （发射单元狭缝）－－－－－－-1.0, 2.5, 5.0, 10.0, 20.0五挡可选。
＊PMT Voltage  （光电管负高压）－－－－－－-400V, 700V, 950V三挡可选。（一般选择700V）
＊Response    （响应速度）－－－－－－－－－－－－0.0004,0.01,0.05,0.1,0.5,2.0,8.0秒Auto八挡可选。速度快峰形分辨率高，但噪音大。速度慢反之。
＊Corrected spectra （光谱校正）－－－－－－－－- 选定后则可使用已校正的光谱函数。
＊Shutter control （光闸控制）－－－－－－－－选择控制状态，样品待测或重复扫描时激发光不能照射到样品上,避免产生化学变化。" l8 J8 S,

＊Replicates （重复次数）－－－－－－－－－－-可在1―99之间选择。（重复扫描用）
＊Cycle  time  （循环周期）－－－－－－－－－－-可在0―180分间选择。（重复扫描用）
（3）Monitor  （模拟监视）'' O+ f ^+ @ l  Y; p
＊Y-Axis Max  （纵轴标尺上限值）－－－－一般样品预扫描后仪器自动赋值。
＊Y-Axis Min  （纵轴标尺下限值）－－－－- 根据需要赋值。
Open data processing window£＊ after data acquisition（测量后打开数据处理窗口）
。测定结果可自动存储，便于后期处理。R一般选定
＊Print report after data acquisition （数据采集后自动打印）－－- 一般不选定。
＊Overlay（重叠光谱图）－－－－-可将光谱图重叠在监视画面上但重复扫描不可设定。  C

（4）Processing  （处理方法）
简介：此界面主要是对已测定的图谱根据用户的要求进行选择处理。;
CAT平均化）－－－－－－－－如选定则对重复测定的图谱进行平均处理。£＊+ n; ?5 Q6 ]5 f4
＊Processing choices （处理方法的选择）－－－－- 有如下四种处理方法：0 y1 ~! M7 `2 _,~
1  Savitsky-Golay Smooth （       ）2 f, P& Y5 ?% y
2） Mean Smooth 平均平滑
3  Median Smooth（中间平滑）. s6 Y  B% q% \" x k5 C
4） Derivative （微分求导）
＊Processing steps （处理顺）－－－－－－－－－－% K% H7 M; S5 j. ^: p G'' o
＊Peak Finding    峰检出－－－－－－－－－－- 有如下三项内容：
1）Integration method （检出方法）－－－－- a Rectangnlar 矩形
                                    b Trapezoid （斜方形）
                                    c Romberg  （罗伯格形） k" p" M" F5 B+

2）Threshold （阈值）－－－－－－－－－－决定信号峰的舍取。赋值范围0.001-1000。小于赋值的峰不打印结果。
3）Sensitivity （灵敏度）－－－－－－可改变放大器的放大倍数。一般设置为“1”。

4）Report  报告格式; J9 H6 Q- u0 M3 A; l2 g. W
＊Output （输出）－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－有如下三种格式可选：
1）Print Report －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－- 打印报告（常用格式）7 N x2 Y  b% B  \ }
2）Use Microsoft Excel －－－－－－－－－－－－将数据变换为微软Excel 格式。
3）Use print generator sheet－－－－－－利用变换器（附选件）打印图表。
         ＊Pientation （方位）－－－－－－－－－－－－－－－－
         ＊Pintable items （打印选项）－－－－－－有五种项目可选：! S C# U c'' e# o
1）Include data    （打印数据）
2）Include method （打印方法）
3）Include graph    （打印图谱）$ ?1 u+ Q! f. V! q" g
4）Include data listing （打印数据表）! V- ` x u/ p7 Y
5）Include peak table 打印峰值表
＊Printer Font  打印机字形－－－－－－－－- 可改变报告的打印字形。
〈五〉时间扫描的简单操作：（Time Scan）  0 u  S8 |5 {/ E ~9 K
简介：此扫描方式是EX,EM的波长均固定，仅观察样品随时间的变化。模拟画面的横坐标轴为时间单位。进入方法与波长扫描相同。 w: h＊ K7 E& t'' e b$ Y u
（1）General  常规
＊Measurement 测量方式－－－－－－－－选择 Time Scan 时间扫描
（其它内容与波长扫描相同，故从略。
（2）Instrument  （仪器条件）
＊Data  mode 数据方式－－－－-Fluorescence  （荧光采集）
                           Luminescence  （发光采集）
                           Phosphorescence磷光采集
＊EX  WL （激发波长）－－－－－－ 0nm,200nm—900nm 设定y

＊EM  WL （发射波长）－－－－－－ 0nm,200nm—900nm 设定＊
＊Time unit （时间单位）－－－－－－ s,ms 两种单位可设定
＊Scan time （扫描周期）－－－－－－ 10–3600s,1000–9999ms范围设定
（其它内容与波长扫描相同，故从略。）
（3）Monitor  模拟监视
＊Y-Axis （纵轴上下限值）－－－－- 一般样品预扫描后仪器自动赋值.
＊X-Axis  （横轴上下限值）－－－－－－时间轴，根据需要设定.
（其它内容与波长扫描相同，故从略。）
（4）Processing  （处理方法）－－－－- 内容与波长扫描相同，从略
（5）Report    （报告格式）－－－－- 内容与波长扫描相同，从略" J, u3 L/ |7 I1 y8 P
〈六〉光度计法的简单操作:  PHOTOMETRY# m0 `  R+ Q5 a- X
简介：光度计法亦称浓度直读法，也称工作曲线法。利用配制的具有梯度的标准样品，先做出一条标准曲线，然后再反测未知样品。  N5 O: H" v L9 }
（1）General  常规'' {  X7 R1 ?3 ]4 c+ Q- m! \
＊Measurement  测量方式－－－－－－-选择 Photometry（光度计）
（其它内容与波长扫描相同，故从略。）
（2）Quantitation 定量条件+ |+ r＊ L9 V6 W$ N N
＊Quantitation type （测量类型）－－－－－－ 1 Wavelength 指定波长
2 Peak area （峰面积）

3）Peak height 峰高'' Z i0 I; e5 L'' w'' P
4）Derivative （导数）
5）Ratio    （比率）" t6 @7 J'' y/ d1 C5 W
＊Calibration type 曲线校正类型－－－－－－－－ 1）None （没有）
                                       2 1 st order（线性方程）
                                       3 2 nd order（二次方程）
                                       4）3 rd order（三次方程）9 W: G. F$ G, v
                                       5）Segmented （折线）
＊Num ber of wavelengths 波长数－－－－－－当曲线校正选择“None” 时波长数可以在1－6间选择。其他校正类型只能在1－3间选择，但此时的波长数并不表示在若干波长值下可以同时测定样品的浓度，仅仅是对信号峰的一种处理方法。
  ＊Concentration unit 浓度单位－－－－－－－－－－根据需要格式设定7 v1 a1 C5 w1 ?; o
＊Manual calibration（手动校正）－－－－－－根据公式校正1 h9 b; k9 y# D; p/ [" s
  ＊Force curve through zero 强制曲线归零7 [, m'' |1 W a e. w
  ＊Digit after decimal point （小数有效位）－－-可以在1－3间赋值
（3） Instrument 仪器条件
   ＊Data mode 数据方式－－－－－－－－－－-  Fluorescence （荧光采集）! k＊ _/ I% X3G
                                       Luminescence （发光采集）
                                       Phosphorescence（磷光采集）7 f0 D2 u4 q# ]
＊Wavelength mode （波长方式）－－－－- EX WL Fixed（激发波长固定）
                                    EM WL Fixed（发射波长固定）
                                    Both WL Fixed（两侧均固定）
＊Fixed WL （波长选定）－－－－－－－－- 可以选定1–6个波长值，波长值赋值范围0nm,200—900nm。
＊EX Slit  （激发单元狭缝）－－－－- 设定范围2.5,5.0,10.0,20.0nm
＊EM Slit  （发射单元狭缝）－－－－- 设定范围2.5,5.0,10.0,20.0nm
＊PMT Voltage 光电管高压－－－－－－- 设定范围 400V,700V,950V8 D8 I4 Y1 K- W$ y8 u''
＊Auto statistic cal.number （自动统计计算）－－－－可以进行平均值，标准偏差，变异系数的计算。为此目的则要设置样品重复个数，此数在2-4000间选择。
＊Replicates  （重复次数）－－－－－－重复测量次数，输入范围1-20。& o/ [＊ e  E, ?
＊Integration Time （积分时间）－－－－- 0.1–10.0秒间设定。, U+ P: `7 `# b" J T
＊Delay  （延迟时间）－－－－－－-启动后经过所设定的时间自动开始测量。
（4）Standards 标准样品表
＊Number of  Samples （标准样品数目的设定）－－－－－－ 1—20间设定。: p9 c5 P＊ r+
＊Update  修定确认－－－－－－－－－－当标样数确定后，点击此框后显示标样表以供赋值。
＊Insert 插入－－－－－－－－－－点击此框可临时插入一个标样条目。
＊Delete 删除－－－－－－－－- 点击此框可临时删除一个标样条目。; d
（5）Monitor 模拟监视
   同前述相同，故从略。% t5 h  {4 b1 q: w& u9 T: ?& a
（6）Report 报告形式
   同前述相同，故从略。
注：标样测量点击Measure框，未知样品测量点击F4键，结束测量点击F9键。

〈七〉三维扫描的简易操作 3-D SCAN
说明：该功能的作用是，当某个样品不知最佳激发波长和最佳发射波长时，利用该功能
   可自动快速地给出最佳条件。并可供其他特殊分析用。2 A2 C  a2 Z＊ \4 G& f& e/

1）General  常规
＊Measurement  测量方式－－－－－－－－－－选择 3—D Scan 方式。6 Y1 y3 b- a1 q5 a, B;
2 Instrument  仪器条件
＊Data mode  数据方式－－－－－－－－可选择Fluorescence荧光或Phosphorescence磷光。
＊EX Start WL 激发起始波长－－－－－－－－- 0nm,200nm—850nm间选择。
＊EX end WL 激发终止波长－－－－－－－－－－-0nm,200nm—900nm间选择。
＊EX Sampling interval 激发扫描间距－－－－- 1—50nm间选择。
＊EM Start WL 发射起始波长－－－－－－－－ 0nm,200nm—850nm间选择。
＊EM end WL 发射终止波长－－－－－－－－- 0nm,200nm—900nm间选择。
＊EM Sampling interval 发射扫描间距－－－－ 1—10nm间选择。
＊Scan speed  扫描速度－－－－－－－－任选。如为了快速，可选30000nm/分。
（3） Monitor  模拟监视    从略。
（4） Processing 数据处理从略。
（5） Report （报告）从略。