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时间分辨荧光分析
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请教各位高手，有没有做过时间分辨荧光分析的详细步骤和注意事项，越详细越好，谢谢啦!（主要是仪器操作） [ Last edited by yixindejia on 2011-8-11 at 22:39 ] |
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qingwa59
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2楼2011-08-12 00:15:55
qingwa59
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【答案】应助回帖
yixindejia(金币+20, 博学EPI+1): 荧 光 光 谱 仪(HITACHI F-4500 Fluorescence spectrophotometer)的仪器操作有吗 2011-08-12 14:05:05
3楼2011-08-12 00:17:37
qingwa59
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我在网上找来的，你看看能不能用 一〉 开机顺序： （1）开机前首先确认主机两个开关：POWER/MAIN均处于关闭状态（搬向O处）。先接（2）通电源开关（POWER），5秒钟后再按下氙灯点灯按钮，当氙灯点燃后 （3）再接通主开关（MAIN）。此时主开关上方绿色指示灯连续闪动三下。, v＊ L; （4）接通电脑及打印机电源，Win98开始建立，随后F-4500操作界面自动进入。 （5）按界面提示选择操作方式。 〈二〉 关机顺序： （1）逆开机顺序实施操作。 （2）当电源开关关闭后5秒钟，再次接通10分钟.目的是仅让风扇工作，使灯室散热）最后关闭电源开关。 〈三〉 操作界面介绍：# G& t; i$ ?! v0 V- s- s8 ^ （1）当前显示的画面为模拟画面，即观测样品峰用。. j! x'' |7 M0 u! X! ]: |# L （2）在模拟画面右侧，是仪器当前状态显示。它给出了当前的信号能量值，激发和发射波长及狭缝值，光闸（Shutter）开/关状态等。# p V O0 w5 e1 v （3）显示屏最上一行为八个菜单杆，分别为 File /Edit /View /Spectrophotometer /Tools /Utility /Window /Help。每个菜单杆下均有子目录，供用户选用。! ] r8 q/ r. w9 p1 |, } （4）为了方便用户操作，将常用的子目录演变为 23 个带彩图的快捷工具栏，用户随意点击后，操作界面立即更换，非常便利。该 23 个快捷栏分布在显示屏的上方及右方，非常醒目。4 |＊ z& y# ?9 E4 k0 ] 〈四〉 波长扫描的简易操作：（Wavelength Scan）& ^" ]$ M: e+ k2 J$ w- I7 v 点击快捷栏“Method” 后，立即显示了分析方法（Analysis Method）的五个重叠界面分别为 “常规”（General）， “仪器条件”（Instrument）， “模拟画面”Monitor， “处理”Processing， “报告”Report。 下面详细介绍每个界面： （1）General （常规） ＊Measurement （测量方式）－－－－－－－－ 选择Wavelength （波长扫描） ＊Operator （操作者名）－－－－－－－－-键入人名 ＊Instrument 仪器型号 －－－－－－－－－－自动给出 Q t- q" T0 _4 ^ ＊Sampling 样品名称 －－－－－－－－－－ ＊Comments 注释表－－－－－－－－－－－－－－可输入简单说明 ＊Load 装载 －－－－－－－－－－－－－－－－调用已存入的条件 ＊Save 存入－－－－－－－－－－－－－－－－-存储现有的条件 ＊Save As （另存）－－－－－－－－－－－－－－ 另存现有的条件 （2）Instrument （仪器条件） ＊Scan mode 扫描方式 －－－－－－－－－－ Excitation 激发波长扫描, y4 J H4 z! T8 T/ r9 | Emission （发射波长扫描） E4 u; W- K: c4 n. g'' K Synchronous （同步扫描） ＊Data mode （数据方式）－－－－－－－－-Fluorescence （荧光采集） ,; Luminescence （发光采集） Phosphorescence（磷光采集） ＊EM WL （发射波长）－－－－－－－－-输入范围 200nm―900nm ＊EX Start WL （激发起始波长）－－－－ 输入范围 200nm—890nm6 J- o1 ?9 Y8 J9 B+ N: c ＊EX End WL （激发终止波长）－－－－-输入范围 210nm—900nm ＊EX WL 激发波长－－－－－－－－－－－－-输入范围 200nm—900nm ＊EM Start WL （发射起始波长）－－－－-输入范围 200nm—890nm- _5 |1 ` l7 G7 X/ }5 D/ ＊EM End WL （发射终止波长）－－－－-输入范围 210nm―900nm$ J M0 S1 }% P, F. _5 ~ ＊Scan speed （扫描速度）－－－－－－－－－－-15,60,300,1200,2400,12000,30000nm/min 六挡可选（磷光扫描：15,60,240nm/min） ＊Delay （延迟时间）－－－－－－－－－－－－输入范围 0¬―99秒（启动后延迟测量） ＊EX Slit （激发单元狭缝）－－－－－－-1.0, 2.5 ,5.0, 10.0, 20.0五挡可选。6 } Y3 ＊EM Slit （发射单元狭缝）－－－－－－-1.0, 2.5, 5.0, 10.0, 20.0五挡可选。 ＊PMT Voltage （光电管负高压）－－－－－－-400V, 700V, 950V三挡可选。（一般选择700V） ＊Response （响应速度）－－－－－－－－－－－－0.0004,0.01,0.05,0.1,0.5,2.0,8.0秒Auto八挡可选。速度快峰形分辨率高，但噪音大。速度慢反之。 ＊Corrected spectra （光谱校正）－－－－－－－－- 选定后则可使用已校正的光谱函数。 ＊Shutter control （光闸控制）－－－－－－－－选择控制状态，样品待测或重复扫描时激发光不能照射到样品上,避免产生化学变化。" l8 J8 S, ＊Replicates （重复次数）－－－－－－－－－－-可在1―99之间选择。（重复扫描用） ＊Cycle time （循环周期）－－－－－－－－－－-可在0―180分间选择。（重复扫描用） （3）Monitor （模拟监视）'' O+ f ^+ @ l Y; p ＊Y-Axis Max （纵轴标尺上限值）－－－－ 一般样品预扫描后仪器自动赋值。 ＊Y-Axis Min （纵轴标尺下限值）－－－－- 根据需要赋值。 Open data processing window£＊ after data acquisition（测量后打开数据处理窗口） 。测定结果可自动存储，便于后期处理。R一般选定 ＊Print report after data acquisition （数据采集后自动打印）－－- 一般不选定。 ＊Overlay（重叠光谱图）－－－－-可将光谱图重叠在监视画面上但重复扫描不可设定。 C （4）Processing （处理方法） 简介：此界面主要是对已测定的图谱根据用户的要求进行选择处理。; CAT平均化）－－－－－－－－ 如选定则对重复测定的图谱进行平均处理。£＊+ n; ?5 Q6 ]5 f4 ＊Processing choices （处理方法的选择）－－－－- 有如下四种处理方法：0 y1 ~! M7 `2 _,~ 1 Savitsky-Golay Smooth （ ）2 f, P& Y5 ?% y 2） Mean Smooth 平均平滑 3 Median Smooth（中间平滑）. s6 Y B% q% \" x k5 C 4） Derivative （微分求导） ＊Processing steps （处理顺）－－－－－－－－－－% K% H7 M; S5 j. ^: p G'' o ＊Peak Finding 峰检出 －－－－－－－－－－- 有如下三项内容： 1）Integration method （检出方法）－－－－- a Rectangnlar 矩形 b Trapezoid （斜方形） c Romberg （罗伯格形） k" p" M" F5 B+ 2）Threshold （阈值）－－－－－－－－－－决定信号峰的舍取。赋值范围0.001-1000。小于赋值的峰不打印结果。 3）Sensitivity （灵敏度）－－－－－－ 可改变放大器的放大倍数。一般设置为“1”。 4）Report 报告格式; J9 H6 Q- u0 M3 A; l2 g. W ＊Output （输出）－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－有如下三种格式可选： 1）Print Report －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－- 打印报告（常用格式）7 N x2 Y b% B \ } 2）Use Microsoft Excel －－－－－－－－－－－－将数据变换为微软Excel 格式。 3）Use print generator sheet－－－－－－ 利用变换器（附选件）打印图表。 ＊Pientation （方位）－－－－－－－－－－－－－－－－ ＊Pintable items （打印选项）－－－－－－ 有五种项目可选：! S C# U c'' e# o 1）Include data （打印数据） 2）Include method （打印方法） 3）Include graph （打印图谱）$ ?1 u+ Q! f. V! q" g 4）Include data listing （打印数据表）! V- ` x u/ p7 Y 5）Include peak table 打印峰值表 ＊Printer Font 打印机字形－－－－－－－－- 可改变报告的打印字形。 〈五〉时间扫描的简单操作：（Time Scan） 0 u S8 |5 {/ E ~9 K 简介：此扫描方式是EX,EM的波长均固定，仅观察样品随时间的变化。模拟画面的横坐标轴为时间单位。进入方法与波长扫描相同。 w: h＊ K7 E& t'' e b$ Y u （1）General 常规 ＊Measurement 测量方式－－－－－－－－选择 Time Scan 时间扫描 （其它内容与波长扫描相同，故从略。 （2）Instrument （仪器条件） ＊Data mode 数据方式－－－－-Fluorescence （荧光采集） Luminescence （发光采集） Phosphorescence磷光采集 ＊EX WL （激发波长）－－－－－－ 0nm,200nm—900nm 设定y ＊EM WL （发射波长）－－－－－－ 0nm,200nm—900nm 设定＊ ＊Time unit （时间单位）－－－－－－ s,ms 两种单位可设定 ＊Scan time （扫描周期）－－－－－－ 10–3600s,1000–9999ms范围设定 （其它内容与波长扫描相同，故从略。） （3）Monitor 模拟监视 ＊Y-Axis （纵轴上下限值）－－－－- 一般样品预扫描后仪器自动赋值. ＊X-Axis （横轴上下限值）－－－－－－时间轴， 根据需要设定. （其它内容与波长扫描相同，故从略。） （4）Processing （处理方法）－－－－- 内容与波长扫描相同，从略 （5）Report （报告格式）－－－－- 内容与波长扫描相同，从略" J, u3 L/ |7 I1 y8 P 〈六〉光度计法的简单操作: PHOTOMETRY# m0 ` R+ Q5 a- X 简介：光度计法亦称浓度直读法，也称工作曲线法。利用配制的具有梯度的标准样品，先做出一条标准曲线，然后再反测未知样品。 N5 O: H" v L9 } （1）General 常规'' { X7 R1 ?3 ]4 c+ Q- m! \ ＊Measurement 测量方式－－－－－－-选择 Photometry（光度计） （其它内容与波长扫描相同，故从略。） （2）Quantitation 定量条件+ |+ r＊ L9 V6 W$ N N ＊Quantitation type （测量类型）－－－－－－ 1 Wavelength 指定波长 2 Peak area （峰面 积） 3）Peak height 峰 高'' Z i0 I; e5 L'' w'' P 4）Derivative （导 数） 5）Ratio （比 率）" t6 @7 J'' y/ d1 C5 W ＊Calibration type 曲线校正类型－－－－－－－－ 1）None （没 有） 2 1 st order（线性方程） 3 2 nd order（二次方程） 4）3 rd order（三次方程）9 W: G. F$ G, v 5）Segmented （折 线） ＊Num ber of wavelengths 波长数－－－－－－ 当曲线校正选择“None” 时波长数可以在1－6间选择。其他校正类型只能在1－3间选择，但此时的波长数并不表示在若干波长值下可以同时测定样品的浓度，仅仅是对信号峰的一种处理方法。 ＊Concentration unit 浓度单位－－－－－－－－－－ 根据需要格式设定7 v1 a1 C5 w1 ?; o ＊Manual calibration（手动校正）－－－－－－ 根据公式校正1 h9 b; k9 y# D; p/ [" s ＊Force curve through zero 强制曲线归零7 [, m'' |1 W a e. w ＊Digit after decimal point （小数有效位）－－-可以在1－3间赋值 （3） Instrument 仪器条件 ＊Data mode 数据方式－－－－－－－－－－- Fluorescence （荧光采集）! k＊ _/ I% X3G Luminescence （发光采集） Phosphorescence（磷光采集）7 f0 D2 u4 q# ] ＊Wavelength mode （波长方式）－－－－- EX WL Fixed（激发波长固定） EM WL Fixed（发射波长固定） Both WL Fixed（两侧均固定） ＊Fixed WL （波长选定）－－－－－－－－- 可以选定1–6个波长值，波长值赋值范围0nm,200—900nm。 ＊EX Slit （激发单元狭缝）－－－－- 设定范围2.5,5.0,10.0,20.0nm ＊EM Slit （发射单元狭缝）－－－－- 设定范围2.5,5.0,10.0,20.0nm ＊PMT Voltage 光电管高压－－－－－－- 设定范围 400V,700V,950V8 D8 I4 Y1 K- W$ y8 u'' ＊Auto statistic cal.number （自动统计计算）－－－－可以进行平均值，标准偏差，变异系数的计算。为此目的则要设置样品重复个数，此数在2-4000间选择。 ＊Replicates （重复次数）－－－－－－ 重复测量次数，输入范围1-20。& o/ [＊ e E, ? ＊Integration Time （积分时间）－－－－- 0.1–10.0秒间设定。, U+ P: `7 `# b" J T ＊Delay （延迟时间）－－－－－－-启动后经过所设定的时间自动开始测量。 （4）Standards 标准样品表 ＊Number of Samples （标准样品数目的设定）－－－－－－ 1—20间设定。: p9 c5 P＊ r+ ＊Update 修定确认－－－－－－－－－－ 当标样数确定后，点击此框后显示标样表以供赋值。 ＊Insert 插 入－－－－－－－－－－ 点击此框可临时插入一个标样条目。 ＊Delete 删 除－－－－－－－－- 点击此框可临时删除一个标样条目。; d （5）Monitor 模拟监视 同前述相同，故从略。% t5 h {4 b1 q: w& u9 T: ?& a （6）Report 报告形式 同前述相同，故从略。 注：标样测量点击Measure框，未知样品测量点击F4键，结束测量点击F9键。 〈七〉三维扫描的简易操作 3-D SCAN 说明：该功能的作用是，当某个样品不知最佳激发波长和最佳发射波长时，利用该功能 可自动快速地给出最佳条件。并可供其他特殊分析用。2 A2 C a2 Z＊ \4 G& f& e/ 1）General 常规 ＊Measurement 测量方式－－－－－－－－－－选择 3—D Scan 方式。6 Y1 y3 b- a1 q5 a, B; 2 Instrument 仪器条件 ＊Data mode 数据方式－－－－－－－－可选择Fluorescence荧光或Phosphorescence磷光。 ＊EX Start WL 激发起始波长－－－－－－－－- 0nm,200nm—850nm间选择。 ＊EX end WL 激发终止波长－－－－－－－－－－-0nm,200nm—900nm间选择。 ＊EX Sampling interval 激发扫描间距－－－－- 1—50nm间选择。 ＊EM Start WL 发射起始波长－－－－－－－－ 0nm,200nm—850nm间选择。 ＊EM end WL 发射终止波长－－－－－－－－- 0nm,200nm—900nm间选择。 ＊EM Sampling interval 发射扫描间距－－－－ 1—10nm间选择。 ＊Scan speed 扫描速度－－－－－－－－ 任选。如为了快速，可选30000nm/分。 （3） Monitor 模拟监视 从略。 （4） Processing 数据处理 从略。 （5） Report （报告） 从略。 |
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