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清新夏青

新虫 (小有名气)

[求助] 有高人做蛋白结晶吗

我现在做的蛋白已经长出了晶体,但晶体没有衍射点,该怎么进行优化啊  

请高手指教一下啊
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jinkui960

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励交流 2011-08-10 17:01:33
清新夏青(金币+1): 2011-08-11 18:11:52
我们以前在做,但没有这种情况,是不是晶体太小的缘故呢?可以对PH等结晶条件做一些优化,看看PH条件的改变会不会影响晶体的衍射!

生物物理所和清华都做得很好,不知道有没有虫虫来自...?
2楼2011-08-10 16:45:36
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BioChemCom

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good! 2011-12-14 16:05:56
这是比较常见的现象。第一:你的没有衍射是在什么光源下做的?2. 衍射时,用的保护剂是什么?这点要请教有经验的人,多尝试几种不同的条件;3. 那就是继续优化。优化的方向分为几个方面:1. 优化晶体的生长条件,包括pH,盐离子浓度、PEG,additives。如果你的晶体不止在一种条件下生长的,可以同时尝试这些不同的条件。2. 优化你的纯化方法,进一步鉴定你纯化蛋白的均一性、温度条件下的稳定性等等。3. 重新做截断的构建、切掉多余的Tag,或者尝试不同物种的类似物等等。
3楼2011-12-14 08:54:33
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