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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量试剂哪个公司的好啊?
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mfkwgeg

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量试剂哪个公司的好啊?

请教各位虫友,我想做实时荧光定量PCR,不知道哪个公司的试剂更加物美价廉呢,有人用过TIANGEN的没,效果怎么样啊?
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1楼 2011-08-09 17:31:09
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cloverplm

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-08-10 18:09:24
天根的酶确实物美价廉，但是我只是做普通PCR用这种酶。荧光定量一般用Roche 或者Invitrigen 的。可能因为机器是Roche的，配套的酶好用一点。
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净——静——竞——进
2楼2011-08-09 22:45:14
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
mfkwgeg(金币+1): 2011-08-10 17:59:55
dhd997(金币+2): good 2011-08-11 18:42:57
试过很多公司的，灵敏度和稳定性都比较好的还是TAKARA的，在模板量足够的情况下基本看不出不同品牌间的质量差别，一旦把模板稀释到10pg/action甚至更低的浓度，好产品的优势就体现出来了。还有要考虑的是批间差，即产品的稳定性怎么样。我的原则是真正好的东西即使多花点钱也值。
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2011-08-10 12:23:10
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tea_gl9871

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

个人推荐bio-rad的ssofast，好用！
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4楼2011-08-10 14:40:32
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apple6299

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-08-10 12:23:10:
试过很多公司的，灵敏度和稳定性都比较好的还是TAKARA的，在模板量足够的情况下基本看不出不同品牌间的质量差别，一旦把模板稀释到10pg/action甚至更低的浓度，好产品的优势就体现出来了。还有要考虑的是批间差， ...

同意楼上，我也一直用TAKARA的QRT-PCR配套试剂，效果不错
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5楼2011-08-10 15:55:10
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mfkwgeg

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-08-10 12:23:10:
试过很多公司的，灵敏度和稳定性都比较好的还是TAKARA的，在模板量足够的情况下基本看不出不同品牌间的质量差别，一旦把模板稀释到10pg/action甚至更低的浓度，好产品的优势就体现出来了。还有要考虑的是批间差， ...

那么请问反应体系有没有比较稳定的经验值呢?
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6楼2011-08-10 18:03:21
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-11 18:43:21
我们学院很多实验室，包括我们，用的都是Takara的。反转录和荧光定量PCR一套都用他们家的。用了这么久觉得还不错。
天根的是便宜，也用过一点，能做出来。但是感觉挺麻烦的，荧光定量PCR需要把两管东西混一起，而且不知道这混好后的mix该怎么存放，说明书上也没找到相应介绍，很纠结。
天根的说明书就薄薄的一张纸，很多东西没说清楚。Takara的是十多页的小册子，而且把市面上常见的qPCR该怎么设置都一一说明了。两家产品我没做过比较试验，但是仅从说明书上就能看出这家公司是否专业了。天根这牌子其实偶也觉得可以，但是还是要加点劲才行。
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7楼2011-08-10 18:15:02
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
西瓜(金币+2): 我用10ul的体系，ROX体积小难加，我就直接加到1mL的Sybr里面，加Sybr时不考虑Rox的体积。 2011-08-10 23:12:43
引用回帖:
6楼: Originally posted by mfkwgeg at 2011-08-10 18:03:21:
那么请问反应体系有没有比较稳定的经验值呢?

以TAKARA的试剂为例，20ul反应体系：
2*mix               10ul
cDNA模板      1ng
正向引物       2ul（10uM）
反向引物       2ul（10uM）
ROX                  0.4UL
Water               up to 20ul
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8楼2011-08-10 19:25:52
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mfkwgeg

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-08-10 19:25:52:
以TAKARA的试剂为例，20ul反应体系：
2*mix               10ul
cDNA模板      1ng
正向引物       2ul（10uM）
反向引物       2ul（10uM）
ROX                  0.4UL
Water               up to 20ul

模板用这么少啊,浓度是怎么确定的啊,是用分光计测的么?
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9楼2011-08-10 21:56:21
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by mfkwgeg at 2011-08-10 21:56:21:
模板用这么少啊,浓度是怎么确定的啊,是用分光计测的么?

nano drop 可以测出1ul的核酸或蛋白的浓度
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
10楼2011-08-11 12:11:52
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