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qingdee

新虫 (小有名气)

★ ★
jhu132llh(金币+2): 鼓励积极应助 2011-12-22 17:35:43
好奇怪啊 ,各实验室的方法不尽相同,
我实验室里边的转基因体系侵染液OD600=0.2,
11楼2011-12-22 14:15:04
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A406

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
jhu132llh(金币+3): 鼓励积极应助 2011-12-22 17:35:48
一般愈伤在不加抗性筛选剂上分化至少有7成以上,材料好坏是关键,材料好坏不仅与培养基有关,更和培养环境有关,早期的愈伤分化比后期的要好。OD0.3——0.6都可以,
12楼2011-12-22 16:07:44
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jinxiaoyi

铁虫 (初入文坛)


jhu132llh(金币+1): 鼓励积极应助 2011-12-26 10:34:03
我们实验室一般暗培养,但光培养的愈伤长的更致密点,看起来舒服,至于到后面的过程貌似效果差不多。
13楼2011-12-23 12:13:37
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jiaxinfish

金虫 (正式写手)


jhu132llh(金币+1): 鼓励积极参与讨论 2011-12-29 10:12:54
b别信日本人,那个说40天拿到苗的人,我跟他交流过,还是有很多trick在里面的,我当时也是重复不出来的。暗陪和光下都可以的,主要是能诱导愈伤的还是培养基的成分。
14楼2011-12-26 22:35:53
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阿德54007

金虫 (正式写手)


jhu132llh(金币+1): 鼓励积极参与讨论 2011-12-29 10:12:49
引用回帖:
5楼: Originally posted by 嫘诺 at 2011-08-10 19:24:47:
非常感谢。实验方法是师姐留下来的方案,培养基配方啊,培养的过程,但是文献中报道的方法各有差异,比方说开始诱导愈伤时采用NB培养基,有的则用N6,分化培养基所加激素也不同,关键就是激素的比例,到底哪种比 ...

我以前做玉米愈伤组织,发现不同品种玉米的愈伤组织对同一种培养基的反应不一样。有的诱导或分化效果很好,有的效果就很差。所以这个配方不是万能的。
阳光温热,岁月静好,你还没来,我怎敢老
15楼2011-12-27 20:44:45
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419249049

木虫 (正式写手)

★ ★
SongQ5285(金币+2): 有些道理 2012-01-05 17:28:05
引用回帖:
1楼: Originally posted by 嫘诺 at 2011-08-06 18:23:36:
虫友们,先遇到些难题,希望有懂得的给指点指点。现在这谢谢大家了。
现在我正在做转基因水稻,水稻品种为日本晴,实验过程中遇到了几点问题
1植株的分化率很低,具体没统计,不过一个皿里30-40块愈伤也就有3个 ...

所以你不能指望大家给你一个确定的答案,因为做转基因的外植体材料基本上都不一样,即使同样是水稻品种种源也存在差异,所以无法确定OD值是0.5还是0.6抑或是0.8,还有关于继代培养几次的问题这个你要去做实验解决这个问题,上面也说了,不同的材料都不一样。别人的实验结果应该只能是你的参考,而不能作为你的答案。如果你有答案了,那要你还做什么啊?所以楼主还是要做实验的,祝你成功!
16楼2011-12-31 18:39:40
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ychen0530

银虫 (初入文坛)

★ ★ ★
SongQ5285(金币+3): 经验很重要,多思考,多交流,多试验 2012-01-05 17:28:42
1.影响分化率的因素很多,对于楼主所反映的问题不好一概而论。这里分享我们实验室作转基因的一些tricks:从共培养转筛选时,先将愈伤组织在只含有头孢的培养基中培养5天左右,然后再将状态好的愈伤组织转入含有筛选压力的培养基中,目的是给转入的抗性基因一个表达的时间,最大限度避免假阴性结果;转基因中使用的培养基在倒好平板凝固后在超净工作台中透干水汽,相对干燥的培养环境有利于愈伤组织的生长和分化;
2.我们的分化时间同样比较长,分化阶段的愈伤组织在5个月的时间里都有陆续分化的现象,求解释;
3.我的侵染液浓度是0.1,我师姐做过更低的,0.02,效果都很好,转化率均在85%以上
4.我们只用继代2次以内的愈伤组织
17楼2012-01-05 11:12:51
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朗朗星宇

铁虫 (初入文坛)

我们的菌体OD值0.4~0.5,好运
18楼2013-04-09 22:26:24
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