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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 关于用农杆菌侵染法获得转基因植物的几点问题
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qingdee

新虫 (小有名气)
★ ★
jhu132llh(金币+2): 鼓励积极应助 2011-12-22 17:35:43
好奇怪啊 ，各实验室的方法不尽相同，
我实验室里边的转基因体系侵染液OD600=0.2，
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11楼2011-12-22 14:15:04
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A406

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
jhu132llh(金币+3): 鼓励积极应助 2011-12-22 17:35:48
一般愈伤在不加抗性筛选剂上分化至少有7成以上，材料好坏是关键，材料好坏不仅与培养基有关，更和培养环境有关，早期的愈伤分化比后期的要好。OD0.3——0.6都可以，
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12楼2011-12-22 16:07:44
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jinxiaoyi

铁虫 (初入文坛)
★
jhu132llh(金币+1): 鼓励积极应助 2011-12-26 10:34:03
我们实验室一般暗培养，但光培养的愈伤长的更致密点，看起来舒服，至于到后面的过程貌似效果差不多。
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13楼2011-12-23 12:13:37
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jiaxinfish

金虫 (正式写手)
★
jhu132llh(金币+1): 鼓励积极参与讨论 2011-12-29 10:12:54
b别信日本人，那个说40天拿到苗的人，我跟他交流过，还是有很多trick在里面的，我当时也是重复不出来的。暗陪和光下都可以的，主要是能诱导愈伤的还是培养基的成分。
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14楼2011-12-26 22:35:53
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阿德54007

金虫 (正式写手)
★
jhu132llh(金币+1): 鼓励积极参与讨论 2011-12-29 10:12:49
引用回帖:
5楼: Originally posted by 嫘诺 at 2011-08-10 19:24:47:
非常感谢。实验方法是师姐留下来的方案，培养基配方啊，培养的过程，但是文献中报道的方法各有差异，比方说开始诱导愈伤时采用NB培养基，有的则用N6，分化培养基所加激素也不同，关键就是激素的比例，到底哪种比 ...

我以前做玉米愈伤组织，发现不同品种玉米的愈伤组织对同一种培养基的反应不一样。有的诱导或分化效果很好，有的效果就很差。所以这个配方不是万能的。
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阳光温热，岁月静好，你还没来，我怎敢老
15楼2011-12-27 20:44:45
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419249049

木虫 (正式写手)
★ ★
SongQ5285(金币+2): 有些道理 2012-01-05 17:28:05
引用回帖:
1楼: Originally posted by 嫘诺 at 2011-08-06 18:23:36:
虫友们，先遇到些难题，希望有懂得的给指点指点。现在这谢谢大家了。
现在我正在做转基因水稻，水稻品种为日本晴，实验过程中遇到了几点问题
1植株的分化率很低，具体没统计，不过一个皿里30-40块愈伤也就有3个 ...

所以你不能指望大家给你一个确定的答案，因为做转基因的外植体材料基本上都不一样，即使同样是水稻品种种源也存在差异，所以无法确定OD值是0.5还是0.6抑或是0.8，还有关于继代培养几次的问题这个你要去做实验解决这个问题，上面也说了，不同的材料都不一样。别人的实验结果应该只能是你的参考，而不能作为你的答案。如果你有答案了，那要你还做什么啊？所以楼主还是要做实验的，祝你成功！
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16楼2011-12-31 18:39:40
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ychen0530

银虫 (初入文坛)
★ ★ ★
SongQ5285(金币+3): 经验很重要，多思考，多交流，多试验 2012-01-05 17:28:42
1.影响分化率的因素很多，对于楼主所反映的问题不好一概而论。这里分享我们实验室作转基因的一些tricks:从共培养转筛选时，先将愈伤组织在只含有头孢的培养基中培养5天左右，然后再将状态好的愈伤组织转入含有筛选压力的培养基中，目的是给转入的抗性基因一个表达的时间，最大限度避免假阴性结果；转基因中使用的培养基在倒好平板凝固后在超净工作台中透干水汽，相对干燥的培养环境有利于愈伤组织的生长和分化；
2.我们的分化时间同样比较长，分化阶段的愈伤组织在5个月的时间里都有陆续分化的现象，求解释；
3.我的侵染液浓度是0.1，我师姐做过更低的，0.02，效果都很好，转化率均在85%以上
4.我们只用继代2次以内的愈伤组织
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17楼2012-01-05 11:12:51
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朗朗星宇

铁虫 (初入文坛)
我们的菌体OD值0.4~0.5，好运
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18楼2013-04-09 22:26:24
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