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关于用农杆菌侵染法获得转基因植物的几点问题
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虫友们，先遇到些难题，希望有懂得的给指点指点。现在这谢谢大家了。 现在我正在做转基因水稻，水稻品种为日本晴，实验过程中遇到了几点问题 1植株的分化率很低，具体没统计，不过一个皿里30-40块愈伤也就有3个出芽的。有的皿里一个也不出。 2分化的比较的慢，大约1个月才会有芽点出现，芽点出来后吧，长成小苗的时间也比较久。 3关于农杆菌侵染时的最佳OD值，是0.5呢还是0.8.OD值应该反映的菌的生长时期吧，那侵染时是不是采用的对数期的菌，那时OD值是多少呢？ 4关于继代有文献称继代4次最好，有的则说可以去掉继代，各位又做转基因水稻的都继代几次啊？ |
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SongQ5285(金币+3): 经验很重要，多思考，多交流，多试验 2012-01-05 17:28:42
SongQ5285(金币+3): 经验很重要，多思考，多交流，多试验 2012-01-05 17:28:42
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1.影响分化率的因素很多，对于楼主所反映的问题不好一概而论。这里分享我们实验室作转基因的一些tricks:从共培养转筛选时，先将愈伤组织在只含有头孢的培养基中培养5天左右，然后再将状态好的愈伤组织转入含有筛选压力的培养基中，目的是给转入的抗性基因一个表达的时间，最大限度避免假阴性结果；转基因中使用的培养基在倒好平板凝固后在超净工作台中透干水汽，相对干燥的培养环境有利于愈伤组织的生长和分化； 2.我们的分化时间同样比较长，分化阶段的愈伤组织在5个月的时间里都有陆续分化的现象，求解释； 3.我的侵染液浓度是0.1，我师姐做过更低的，0.02，效果都很好，转化率均在85%以上 4.我们只用继代2次以内的愈伤组织 |
17楼2012-01-05 11:12:51
zqt123_1981
木虫 (小有名气)
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2楼2011-08-08 13:59:02
liling77ll
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3楼2011-08-09 16:02:54
4楼2011-08-10 13:28:12