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madengyu

禁虫 (小有名气)
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【分子生物】EPI帖

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1楼 2011-08-04 17:31:12
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): good 2011-08-05 10:44:33
三个保护碱基没有必要完全加C，可以GCAT混加，当然了这要看你的引物序列的GC含量和Tm值了；
引物1        cccgaattcatgaggttcactttgatcg
引物2        cccaagcttttagtgaacagtaggcag

这两条引物我分析了一下，是可以用的，只不过第一条引物的Tm值稍微有些高，你可以把前面保护碱基改成A或者T，这个无所谓的；
看图：（分析软件：invitrogen vector NTI）

第一条引物

第二条引物

两条引物共同分析！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
7楼2011-08-05 10:29:32
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cloverplm

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 有道理 2011-08-06 11:48:26
最好再给出模板的序列，分析结果能更准确。也可以用Prmier Select， primer 来评估。
赞一下(1人) 回复此楼
净——静——竞——进
2楼2011-08-04 21:50:23
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madengyu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2011-08-04 21:59:41
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-05 08:08:56
引物的保护碱基不要设计三个相同的碱基，尤其像三个C或者G，另外保护碱基最好设计5个，因为PCR扩增在5‘是很容易丢掉1-2碱基的，那样你的酶切位点很容易切不开
赞一下(1人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-08-04 23:47:17
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