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madengyu
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1楼
2011-08-04 17:31:12
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天使托
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dhd997(金币+5, MolEPI+1): good 2011-08-05 10:44:33
三个保护碱基没有必要完全加C,可以GCAT混加,当然了这要看你的引物序列的GC含量和Tm值了;
引物1 cccgaattcatgaggttcactttgatcg
引物2 cccaagcttttagtgaacagtaggcag
这两条引物我分析了一下,是可以用的,只不过第一条引物的Tm值稍微有些高,你可以把前面保护碱基改成A或者T,这个无所谓的;
看图:(分析软件:invitrogen vector NTI)
第一条引物
第二条引物
两条引物共同分析!
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7楼
2011-08-05 10:29:32
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cloverplm
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★
1949stone(金币+1): 有道理 2011-08-06 11:48:26
最好再给出模板的序列,分析结果能更准确。也可以用Prmier Select, primer 来评估。
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净——静——竞——进
2楼
2011-08-04 21:50:23
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madengyu
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3楼
2011-08-04 21:59:41
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空谷幽风
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dhd997(金币+2): good 2011-08-05 08:08:56
引物的保护碱基不要设计三个相同的碱基,尤其像三个C或者G,另外保护碱基最好设计5个,因为PCR扩增在5‘是很容易丢掉1-2碱基的,那样你的酶切位点很容易切不开
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼
2011-08-04 23:47:17
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