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[求助]
细胞毒性的相关研究方法-----求助！跪请大家帮忙！
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由于想做关于有机物对人或者鱼细胞毒性的研究，但是本人是第一次接触细胞毒性，因此想了解下测定细胞毒性的方法都有哪些，除了传统的MTT 和流失细胞术，还有哪些比较常用的方法，基本原理和操作步骤最好也能有。 要是能有这方面相关的文献综述最好了，麻烦传给我一份，谢谢您！ 有某一中具体方法的介绍文章发给我也谢谢！ 跪求大侠们帮忙！ |
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l-c-l
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【答案】应助回帖
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jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-07-26 13:21:27
中药2000(金币+5): 谢谢应助。 2011-07-26 13:56:32
qinhw037(金币+3): 谢谢 2011-07-26 17:57:19
qinhw037(金币+7): 2011-08-02 14:32:43
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qinhw037(金币+7): 2011-08-02 14:32:43
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这个范围太大了，现在有很多方法，CCK-8 Assay，XTT法，SRB法和集落形成实验（比较鼓励使用）.当然还有一些像3H-tdR掺入，Ci51释放实验，ATP-生物发光实验等，有条件也可以考虑。 最广泛应用的是MTT和SRB法，多花钱的话可以考虑CCK-8（同仁化学）替代MTT法，优点很多。 以SRB 实验为例，大概步骤： 1. 取处于对数生长期的细胞，胰酶消化（悬浮细胞无需胰酶消化）后收集细胞，进行血细胞计数板计数，用含10%牛血清的培养液调整细胞浓度至所需浓度，接种于96孔培养板，每孔加入细胞悬液180μl，根据细胞类型及实验周期选择细胞数1000-40000个/孔左右。置37℃，5％CO2培养箱内培养12-24h。 2. 每孔添加20μl体积的药物，使每孔的总体积为200μl，继续进行培养实验设计所要求的给药时间。 3. 细胞的固定操作方法根据细胞是否贴壁及贴壁程度而有所不同。 贴壁细胞：终止培养后，弃去上清；每孔添加200μl PBS溶液，然后缓慢加入50μl 预冷的50%三氯乙酸溶液（TCA），使得每孔TCA终浓度为10%，细胞不同，使用TCA浓度也会有所不同。 半贴壁细胞或悬浮细胞：每孔直接添加50μl 浓度为80%的TCA溶液。 添加TCA后，将细胞培养板置于4℃固定处理1h。 4. 固定结束后，弃去上清培养液，用蒸馏水冲洗培养板4-5次，置于室温晾干。 5. 每孔加入100μl SRB溶液，进行染色处理10min-30min。 6. 染色结束后每孔加入适量1%的乙酸溶液进行清洗，以除去未结合的SRB，反复处理5次。并于室温下晾干。 7. 每孔加入100μl-200μl 浓度为10mM的Tris base溶液（pH 10.5）后，振荡培养板10-30min，以使特异结合的SRB完全溶解。 8. 将培养板置于酶标仪中，564nm处测OD值。 9. 结果处理。利用以下计算方法计算细胞抑制率 （a） 若实验组OD平均值大于或等于该组Day 0的OD值， % of control cell growth=(mean ODsample- mean ODday0)/ (mean ODcontrol- mean ODday0)×100% （b） 若实验组OD平均值小于该组Day 0的OD值，% of control cell growth = (mean ODsample- mean ODday0)/ mean ODday0×100% % 抑制率 = 100 − % of control cell growth Reference: Vanicha Vichai and Kanyawim Kirtikara. Sulforhodamine B colorimetric assay for cytotoxicity screening. Nature Protocols. (2006),1: 1112 – 1116 |
2楼2011-07-26 11:14:13
