| 查看: 321 | 回复: 1 | |||
[求助]
细胞毒性的相关研究方法-----求助！跪请大家帮忙！
|
|
由于想做关于有机物对人或者鱼细胞毒性的研究，但是本人是第一次接触细胞毒性，因此想了解下测定细胞毒性的方法都有哪些，除了传统的MTT 和流失细胞术，还有哪些比较常用的方法，基本原理和操作步骤最好也能有。 要是能有这方面相关的文献综述最好了，麻烦传给我一份，谢谢您！ 有某一中具体方法的介绍文章发给我也谢谢！ 跪求大侠们帮忙！ |
回复此楼» 猜你喜欢
澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生（3个名额）地质化工冶金领域
已经有54人回复
-
我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人
已经有15人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有29人回复
-
关于Filecode分析方法
已经有12人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有11人回复
-
小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊
已经有10人回复
-
阿姨
已经有4人回复
-
一作与独作在应聘高校教师时区别大吗
已经有4人回复
-
静等基金结果
已经有21人回复
-
FileCode能看出啥？
已经有28人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 【急】请大家帮忙看一下这个offer是否合乎要求，新手散光所有金币求助~~
已经有12人回复
- 【求助/交流】最近细胞总出问题，大家帮帮忙。
已经有3人回复
- 【求助】麻烦问一下，进行材料的细胞毒性测试时，一般出几组平行试验？
已经有10人回复
- 【求助】大家帮忙鉴定下读博的邀请信是否符合要求
已经有22人回复
- 【求助】想考分析化学研究生。很迷惑考哪，请大家帮忙
已经有10人回复
- 【求助/交流】药物的细胞毒性试验
已经有6人回复
- 【求助】细胞毒性实验数据的取舍
已经有12人回复
- 【求助】细胞毒性实验~~
已经有10人回复
- 【求助】毒性研究~ 大家帮忙
已经有4人回复
- 【求助】大家帮忙参考一下研究生定题
已经有12人回复
- 【求助】做过细胞毒性实验的请进
已经有6人回复
- 【求助】请大家帮忙推荐个关于毒理和毒代方面的sci收录的杂志
已经有4人回复
l-c-l
金虫 (正式写手)
- PhEPI: 1
- 应助: 58 (初中生)
- 金币: 2434.4
- 红花: 10
- 帖子: 773
- 在线: 130.8小时
- 虫号: 1311363
- 注册: 2011-05-31
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤免疫
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-07-26 13:21:27
中药2000(金币+5): 谢谢应助。 2011-07-26 13:56:32
qinhw037(金币+3): 谢谢 2011-07-26 17:57:19
qinhw037(金币+7): 2011-08-02 14:32:43
jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-07-26 13:21:27
中药2000(金币+5): 谢谢应助。 2011-07-26 13:56:32
qinhw037(金币+3): 谢谢 2011-07-26 17:57:19
qinhw037(金币+7): 2011-08-02 14:32:43
|
这个范围太大了，现在有很多方法，CCK-8 Assay，XTT法，SRB法和集落形成实验（比较鼓励使用）.当然还有一些像3H-tdR掺入，Ci51释放实验，ATP-生物发光实验等，有条件也可以考虑。 最广泛应用的是MTT和SRB法，多花钱的话可以考虑CCK-8（同仁化学）替代MTT法，优点很多。 以SRB 实验为例，大概步骤： 1. 取处于对数生长期的细胞，胰酶消化（悬浮细胞无需胰酶消化）后收集细胞，进行血细胞计数板计数，用含10%牛血清的培养液调整细胞浓度至所需浓度，接种于96孔培养板，每孔加入细胞悬液180μl，根据细胞类型及实验周期选择细胞数1000-40000个/孔左右。置37℃，5％CO2培养箱内培养12-24h。 2. 每孔添加20μl体积的药物，使每孔的总体积为200μl，继续进行培养实验设计所要求的给药时间。 3. 细胞的固定操作方法根据细胞是否贴壁及贴壁程度而有所不同。 贴壁细胞：终止培养后，弃去上清；每孔添加200μl PBS溶液，然后缓慢加入50μl 预冷的50%三氯乙酸溶液（TCA），使得每孔TCA终浓度为10%，细胞不同，使用TCA浓度也会有所不同。 半贴壁细胞或悬浮细胞：每孔直接添加50μl 浓度为80%的TCA溶液。 添加TCA后，将细胞培养板置于4℃固定处理1h。 4. 固定结束后，弃去上清培养液，用蒸馏水冲洗培养板4-5次，置于室温晾干。 5. 每孔加入100μl SRB溶液，进行染色处理10min-30min。 6. 染色结束后每孔加入适量1%的乙酸溶液进行清洗，以除去未结合的SRB，反复处理5次。并于室温下晾干。 7. 每孔加入100μl-200μl 浓度为10mM的Tris base溶液（pH 10.5）后，振荡培养板10-30min，以使特异结合的SRB完全溶解。 8. 将培养板置于酶标仪中，564nm处测OD值。 9. 结果处理。利用以下计算方法计算细胞抑制率 （a） 若实验组OD平均值大于或等于该组Day 0的OD值， % of control cell growth=(mean ODsample- mean ODday0)/ (mean ODcontrol- mean ODday0)×100% （b） 若实验组OD平均值小于该组Day 0的OD值，% of control cell growth = (mean ODsample- mean ODday0)/ mean ODday0×100% % 抑制率 = 100 − % of control cell growth Reference: Vanicha Vichai and Kanyawim Kirtikara. Sulforhodamine B colorimetric assay for cytotoxicity screening. Nature Protocols. (2006),1: 1112 – 1116 |
2楼2011-07-26 11:14:13
