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lanhuaorchid

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orchid

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[求助] 有人做关于多重PCR方面的东西吗

有人在做关于多重PCR的东西吗，请给一些指导和建议，尤其是在特异性引物的寻找上，是自己设计吗，谢谢

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orchid

1楼 2011-07-25 20:48:32

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ybs007

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

lanhuaorchid(金币+1): 谢谢啦 2011-07-26 20:23:56

我做过一点这方面的。个人认为引物的设计跟普通的没什么差别，主要是几条引物之间TM值不能差别太大，不能有互补序列，如果担心引物特异性可以BLAST一下。从我做的多重PCR来看，最难的还是在体系和条件的摸索。正常来说引物确定之后条件也就定了，但是对于多重PCR常常出现你意想不到问题。在条件的摸索上我建议你一对一对引物做梯度，然后根据每对引物的条件取舍。开始摸索的时候千万不要吝啬内点taq，用大体系的来做，小体系的不稳定，耽误了我不少事。

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平生我自知

2楼2011-07-25 21:00:01

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