24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

libing198968

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 382.8
帖子: 39
在线: 65小时
虫号: 1137226
注册: 2010-11-02
性别: GG
专业: 水产生物遗传育种学

[求助] RACE实验中的 GC-Rich 问题

大家好，我刚开始做RACE的新兵，我用的是Clontech的SMARTer™ RACE cDNA Amplification Kit。说明书上提示说GC含量过高，不能得到预期产物，就要用Clontech 提供Advantage GC 2 Polymerase Mix (Cat. No. 639114) and PCR Kit (Cat. Nos. 639119 &639120) 来有效扩增 GC-rich模板。
我想问一下，对于植物而言，GC含量多少以上就算是GC含量过高呢？
还有就是假设预期的GC含量比较高，但真实的GC含量没有那么高，用Advantage GC 2 Polymerase Mix 来扩增会不会更加影响扩增效率呢？
求大侠指点

回复此楼

» 猜你喜欢

SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点已经有0人回复
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有147人回复
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析已经有0人回复
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性已经有0人回复
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点已经有0人回复
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记已经有0人回复
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点已经有0人回复
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用已经有0人回复
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项已经有0人回复
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展已经有0人回复

生活没有彩排，所以任何时候都要好好表现，因为你没有再来一次

1楼 2011-07-19 16:33:09

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

Huobol

至尊木虫 (著名写手)

应助: 15 (小学生)
金币: 14473.1
散金: 70
红花: 7
帖子: 1274
在线: 162.9小时
虫号: 1214385
注册: 2011-02-26
性别: GG
专业: 基因表达调控与表观遗传学

引用回帖:

13楼: Originally posted by fundog at 2014-04-25 20:42:53
3‘端三个碱基g为RNA, 3'末端需要做磷酸化修饰，RNAase-free-HPLC纯化...

我测序中得到的SMARTer II A Oligonucleotide
AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT AC AGGGG
AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT AC AGGGA
上面是不同时间做的5‘RACE，XXXXX分别为AGGGG和AGGGA，不太一样，虽然这对5‘RACE没有影响，毕竟后面的序列是5’UTR。既然你说“3‘端三个碱基g为RNA, 3'末端需要做磷酸化修饰”，看来我第一次做的AGGGG的确有3个连续的G。不知道本帖其他虫友有类似的测序结果吗？最重要的如果自己合成，该如何填写引物合成单啊是不是就写这个AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT AC AGGGG序列，末端的磷酸化修饰如何说名啊？（不能合成就算了）