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libing198968

银虫 (初入文坛)

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[求助] RACE实验中的 GC-Rich 问题

大家好，我刚开始做RACE的新兵，我用的是Clontech的SMARTer™ RACE cDNA Amplification Kit。说明书上提示说GC含量过高，不能得到预期产物，就要用Clontech 提供Advantage GC 2 Polymerase Mix (Cat. No. 639114) and PCR Kit (Cat. Nos. 639119 &639120) 来有效扩增 GC-rich模板。
我想问一下，对于植物而言，GC含量多少以上就算是GC含量过高呢？
还有就是假设预期的GC含量比较高，但真实的GC含量没有那么高，用Advantage GC 2 Polymerase Mix 来扩增会不会更加影响扩增效率呢？
求大侠指点

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生活没有彩排，所以任何时候都要好好表现，因为你没有再来一次

1楼 2011-07-19 16:33:09

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Neo2000

木虫 (著名写手)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2011-07-20 22:14:45
GC含量在65%以上就是GC rich了，如果实际的GC含量没有预期的高，那么你采用做GC rich的盒子来做虽然降低了扩增效率但提高了特异性，理论上讲是这样，但如果引物的Tm值很低，那么过高的退化温度会让引物很难结合到模 ...

这个不是绝对的啊，实在没地方了，用这块gc高的区域也能做出来的，尽量选择比较均匀的地方

[ 发自小木虫客户端 ]