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20100136

铜虫 (初入文坛)

[求助] 冰冻切片前的组织处理(小鼠肺组织) 甲醛会导致FITC荧光淬灭吗?

请教各位虫友:

现有FITC标记的蛋白质,想通过冰冻切片后荧光显微镜观察该蛋白质在肺组织的分布情况。问题在于:冰冻切片前的组织应该如何处理?

1.新鲜组织直接切片:之前试过一次,由于肺泡的存在,肺组织比较柔软,导致组织形态发生变化,荧光显微镜下观察好像被压皱的样子。所以考虑下面的甲醛固定法。

2.甲醛固定后再切片:生理盐水灌流后甲醛灌流固定再切片观察。担心的问题是:甲醛会不会影响FITC的荧光,会引起FITC荧光淬灭吗?

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q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

喵星人

【答案】应助回帖

我最近也在做这个问题,我们做的是心脏,不知道是FITC没结合好的l原因还是什么,用甲醛固定后,做的石蜡切片,但在荧光显微镜下,整片都是一个颜色。看不到FITC的荧光。 我想问下楼主,做冰冻切片不用固定剂会不会有这 种情况,我也想用冰冻切片,但不知道哪有这机器,本实验室没有,
2楼2012-08-15 09:47:23
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