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暖木warm金虫 (正式写手)
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过完离子交换柱后如何清洗处理？怎样保存？不卸柱会不会对离子交换剂不好？
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| 过完DEAE纤维素柱后，如何清洗处理柱子，不卸下填料会不会对填料不好呢？因为过得是蛋白，会不会发霉之类的？ |
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【答案】应助回帖
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silicare(金币+5, EPI+1): 谢谢参与 2011-07-16 07:55:47
暖木warm(金币+5): 谢谢 2011-07-16 18:00:39
silicare(金币+5, EPI+1): 谢谢参与 2011-07-16 07:55:47
暖木warm(金币+5): 谢谢 2011-07-16 18:00:39
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DEAE纤维素是弱阴离子交换层析填料，可以用氯化钠浓度梯度来洗脱，但是不是所有的蛋白质和色素都能被洗下来的，离子交换填料比疏水层析填料更容易结合蛋白质和色素，所以在层析结束之后应该用高浓度的氯化钠来洗脱，如果肉眼看不见有色素被吸附，那就用5倍柱床体积的1M氯化钠来洗脱，用去离子水来洗至电导率为零（一般需要起码5倍柱床体积），再用0.1M氢氧化钠来洗脱2倍柱床体积，用去离子水洗至电导率为零之后，用20%乙醇冲洗2倍柱床体积。 如果肉眼看见吸附色素，那么氯化钠要用2M，氢氧化钠要用0.5M，乙醇要用70%的，最后才是20%乙醇，各步骤之间要用去离子水冲洗干净才可以接下一个步骤。 固体杂质的污染就不好处理了，所以最好各种溶液都要事先用0.45微米的滤膜抽滤。发霉应该是不会的，蛋白质样品经过0.22微米滤膜过滤之后应该是不带有微生物细胞的，在层析过程中带入的微生物在20%乙醇中也应该长不起来的。我们实验室所有层析柱和填料都是保存在20%乙醇中。层析柱也不用拆卸，免得下次还要重新装填料。 |
2楼2011-07-16 02:29:30