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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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暖木warm

金虫 (正式写手)

[求助] 过完离子交换柱后如何清洗处理?怎样保存?不卸柱会不会对离子交换剂不好?

过完DEAE纤维素柱后,如何清洗处理柱子,不卸下填料会不会对填料不好呢?因为过得是蛋白,会不会发霉之类的?
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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+5, EPI+1): 谢谢参与 2011-07-16 07:55:47
暖木warm(金币+5): 谢谢 2011-07-16 18:00:39
DEAE纤维素是弱阴离子交换层析填料,可以用氯化钠浓度梯度来洗脱,但是不是所有的蛋白质和色素都能被洗下来的,离子交换填料比疏水层析填料更容易结合蛋白质和色素,所以在层析结束之后应该用高浓度的氯化钠来洗脱,如果肉眼看不见有色素被吸附,那就用5倍柱床体积的1M氯化钠来洗脱,用去离子水来洗至电导率为零(一般需要起码5倍柱床体积),再用0.1M氢氧化钠来洗脱2倍柱床体积,用去离子水洗至电导率为零之后,用20%乙醇冲洗2倍柱床体积。

如果肉眼看见吸附色素,那么氯化钠要用2M,氢氧化钠要用0.5M,乙醇要用70%的,最后才是20%乙醇,各步骤之间要用去离子水冲洗干净才可以接下一个步骤。

固体杂质的污染就不好处理了,所以最好各种溶液都要事先用0.45微米的滤膜抽滤。发霉应该是不会的,蛋白质样品经过0.22微米滤膜过滤之后应该是不带有微生物细胞的,在层析过程中带入的微生物在20%乙醇中也应该长不起来的。我们实验室所有层析柱和填料都是保存在20%乙醇中。层析柱也不用拆卸,免得下次还要重新装填料。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-07-16 02:29:30
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