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关于PAL苯丙氨酸解氨酶活性测定的试验
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| 在测定竹笋的PAL苯丙氨酸解氨酶活性的试验中，对照应该怎么做？是用煮过失活的酶液还是用没煮的？我在试验时用的是煮过失活的，师兄说是用没煮的，没煮的酶液做对照时，自动调零跳动的很厉害（用分光光度计测定时）。到底怎么回事？ |
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hkqgeoffrey
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5楼2013-08-03 15:30:42
【答案】应助回帖
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咸鱼(金币+5, EPI+1): good~ 2011-07-15 13:07:05
大米小麦(金币+1): 2011-08-02 08:59:33
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大米小麦(金币+1): 2011-08-02 08:59:33
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PAL的提取与活性的测定 按照Lister等的方法[19]并略有改进. 0.5 g甘薯材料加入5 mL的提取液[0•2 M硼酸盐缓冲液(pH8.8), 0.018 Mβ-巯基乙醇], 0.1 g PVPP(以去除酚类物质对颜色的干扰),加少量石英砂,于-20℃预冷的研钵中冰浴研磨, 4层纱布过滤.滤液经4℃, 15 000 g离心20 min,取上清液作为粗酶液,用于PAL活性测定. 取1 mL粗酶液加2 mL蒸馏水再加1 mL反应底物(0•02 M的L-苯丙氨酸),对照不加底物,加1mL蒸馏水. 34℃恒温水浴30 min, 加0.5 mL 35%的三氯乙酸(TCA)终止反应. 12 000 g离心10 min去除变性蛋白,于290 nm波长处测定吸光度. 以1 mL反应液每小时在290 nm处吸光度变化0.01为1个酶活单位, 用U表示 ----- Li YP. The correlation between anthoeyanidin accumulation and activities of enzymes involved in anthoeyanidin biosynthesis in puple-fleshed sweetpotato[Ipomoea batatas(L.)Lam.][D]. Southwest University, 2010.(in chinese) ----Lister CE, Lancaster JE. Developmental changes in enzymes of flavonoid biosynthesis in the skins of ted and green apple cultivars [J]. Journal of the Science of Food and Agriculture, 1996, 71: 313-320. |
2楼2011-07-15 10:00:34
4楼2013-07-31 22:25:42
